小鼠睾丸足细胞体外诱导成熟T淋巴细胞凋亡及其机理的实验研究

发布时间：2020-05-17 20:43

【摘要】：组织移植是整形外科常用的治疗手段之一。目前整形外科临床应用最多的是自体组织移植，但自体组织存在来源有限、损害供区、增加患者痛苦等不足。异体（种）组织来源广泛，取材方便，形状逼真，但免疫排斥反应的存在使其在整形外科的临床应用受到极大的限制。既往的研究表明，异体组织移植排斥反应的发病机理主要为T 淋巴细胞介导的免疫应答。尽管免疫抑制剂能够降低T淋巴细胞活性，但应用后常常造成全身免疫状态低下、易发生感染等危险。因此，如能单纯消除移植物周围局部浸润激活的T淋巴细胞，则能在不损害全身免疫状态的情况下使移植物免受排斥反应而存活。近年来对免疫赦免的研究结果为这一设想的实现带来了曙光。人们很早就发现人体内存在着一些免疫赦免区如眼球、睾丸及脑组织等。近来的研究发现这些部位的组织均能表达FasL，很可能通过Fas/FasL途径诱导Fas~+的T淋巴细胞凋亡，从而形成局部无淋巴细胞浸润的免疫赦免环境。在睾丸组织中睾丸足细胞持续表达 FasL。上述研究结果启发人们能够应用FasL 或睾丸足细胞保护异体（种）组织移植物，使移植物免受排斥反应的侵害，延长其在受体内的存活。虽然目前对FasL保护异体（种）移植物的作用尚存有争议：1、FasL延长异体（种）移植物在受体内的存活，2、FasL作为前炎性分子，吸引并激活粒细胞，加剧而不是抑制移植排斥反应的发生，但动物实验的结果却都显示睾丸足细胞与异体细胞混合移植，延长了移植细胞在受体内的存活。然而对睾丸足细胞在此过程中的具体作用机制及调控因素尚未完全阐明。 2 第二军医人学惭卜论义中义摘要－3－本研究的目的是： 1．观察体外条件下睾丸足细胞对成熟T淋巴细胞凋亡的影响。 2．探讨睾丸足细胞诱导T淋巴细胞凋亡的具体机制。 3．深入了解FasL在睾丸足细胞诱导T淋巴细胞凋亡过程中的作用。 4．探讨应用FasL及睾丸足细胞保护异体（种）移植物的可行性，为应用翠丸足细胞及FasL保护异体（种）移植物的在体研究及临床应用提供实验依据。本研究包括以下主要内容：一、体外联合培养条件下小鼠晕丸足细胞对成熟T淋巴细胞影响的研究目的：探讨体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞对成熟T淋巴细胞凋亡的影响。方法：用TUNEL标记，核酸电泳、电镜、流式细胞术检测对照组厂淋巴细胞卜A组厂淋巴细胞＋培养睾丸足细胞24 h培养上清卜 B组厂淋巳细胞＋睾丸足细胞乃组中小鼠成熟 T淋巴细胞的凋亡及其量的变化。结果：3组细胞电镜下均可见部分细胞染色质浓集，成块状或环状位于核膜内侧，核固缩，，凋亡小体形成； TUNEL标记见部分细胞核染色呈深蓝色；核酸电泳均出现典型DNA 梯状带（ladder）：流式细胞术检测 A、B两组 T淋巴细胞凋亡量均明显高于对照组u＜0刀1XB 组T淋巴细胞凋亡量显著高于A组（尸＜0刀1）。二、晕丸足细胞体外诱导成熟T淋巴细胞凋亡时FasL作用的研究目的：研究 FasL在睾丸足细胞诱导成熟 T淋巴细胞凋亡过程中的具体作用。方法：设计正义、反义及错配引物阻断宰丸足细胞FasL 3 第＿军匝人学助1：论义中义摘要－4－的表达，建立转染FasL基因井持续表达的小鼠表皮细胞株，运用原位杂交、免疫组化、Western blot 等检测上述细胞及其培养上清中 FaSL的表达，运用流式细胞学技术检测上述细胞与成熟 T淋巴细胞混合培养后T淋巴细胞凋亡率的差异。结果：翠丸足细胞及其培养上清中均有FasL的表达，转染FasL基因的表皮细胞有FasL的表达，但其培养上清中则未检测到FasL蛋白的表达，反义引物作用后在睾丸足细胞及其上清中基本检测不到FasL；转染与未转染的表皮细胞诱导T淋巴细胞凋亡量无明显区别（尸＞0刀5），经反义引物作用后睾丸足细胞诱导T淋巴细胞凋亡量显著减少（P＜0刀1）。结论： 1．体外条件下睾丸足细胞能够诱导成熟T淋巴细胞凋亡。 2．FasL是睾丸足细胞体外诱导成熟T淋巴细胞凋亡过程中的主要因素但不是唯一因素；睾丸足细胞主要是由于表达FasL从而诱导表达 Fas的成熟T淋巴细胞凋亡，这可能是形成睾丸免疫赦免的主要机制。 3．转染有FasL基因并持续表达的细胞不能有效地诱导成熟T淋巴细胞凋亡；FasL诱导成熟 T淋巴细胞凋亡尚需其它蛋白的协同作用；单纯转染FasL基因尚不能使同种异体移植物免受排斥反应的损害。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R392.4

【参考文献】