人TNF-α嵌合抗体体外亲和力成熟作用研究

发布时间：2020-05-27 08:45

【摘要】：本论文的创新点：通过不同试验方法体外获得亲和力提高的新型抗人TNF-α 嵌合抗体，并保持抗体的中和功能不变；建立基于抗原抗体相互识别的立体结构 信息预测判断抗体亲和力及抗原识别位点的新方法；尝试在计算机模建基础上， 通过定点突变进一步提高抗体亲和力。 人肿瘤坏死因子α(hTNFα)是一种由单核、巨噬、T淋巴、中性粒、肥大或 内皮细胞分泌产生的细胞因子，可介导多种生物学活性。当hTNF-α在体内的大量 产生和释放可引起机体免疫平衡失调，并可与其它炎症因子一起产生多种病理损 伤，例如恶病质和败血症休克所致的多器官功能衰竭、类风湿性关节炎(RA)、关节 强直性脊柱炎(AS)、多发性硬化症(MS)、炎症性肠病(IBD)、移植物抗宿主病 (GVHD)和骨髓造血紊乱综合症(MDS)等多种疾病。因此，通过应用中和hTNF-α 活性的抗体，可阻断因hTNF-α水平异常增高导致的机体病理性损伤，最终达到对 疾病的有效治疗目的。美国Centocor公司研制生产的抗hTNF-α嵌合抗体(商品名 Remicade(？))，美国FDA、欧盟和日本相继已批准用于RA、结肠Crohn病和AS 的临床治疗。 本研究组于上世纪八十年代已经制备得到抗hTNFα鼠源单克隆抗体(McAb) Zd12，具有中和hTNFα细胞毒性功能，其亲和力在Ka=8×107L／mol。在其人源化过 程中，抗体的亲和力有显著地降低。本课题借助链替换(Chain Shuffling)方法，以 鼠源抗体Z12为母本，，通过噬菌体抗体库技术亲和筛选，借助计算机合理设计获 得高亲和力嵌合抗体CH22，以期达到在保持抗体中和活性的同时显著提高抗体亲 和力的目的。同时借助计算机模建得到的抗原(hTNF-α)与抗体(CH22) 相互作 中文摘要 用的立体结构信息，通过点突变得到新的人源化抗体，进一步提高抗体亲和力和 抗体中和活性。通过以上研究，获得抗hTNF一a高亲和力嵌合抗体，与212比较亲 和力最高提高750倍，比Remicad姻亲和力提高6倍:其识别hTN下一a功能表位不 同于Remicad礴，但中和hTNF一a活性能力与Renticad洲匆相同。嵌合抗体CH22与 已公开发表的抗体均有所不同，具有独立知识产权，此方面研究申请一项发明专 利。
【图文】：

DNA重组等[361。其最主要的核心技术是噬菌体抗体库技术[3v〕。噬菌体抗体库技术能够有效的将基因型和表型有机的统一起来，通过扩增一筛选一再扩增的循环过程(见图1)[38】，最终获得高亲和力抗体基因序列，并用于进一步的试验研究。

Rr-PcR扩增得到抗体基因文库
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392

【引证文献】

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本文编号：2683272