HBV囊膜蛋白与HCV核心蛋白基因联合免疫研究

发布时间：2020-06-16 14:54

【摘要】：基因免疫既能诱导机体产生体液免疫又能诱导产生细胞免疫，给慢性持续性病毒感染的防治带来了新希望。HCV C蛋白结构保守，诱导产生的免疫应答能够使HCV感染者表现为自限型或非临床型感染，是制备HCV预防及治疗性疫苗较有价值的抗原蛋白。研究HCV C蛋白基因修饰后，所诱导的基因免疫应答和细胞因子对HCV C蛋白基因免疫的调节作用，将有助于HCV疫苗的研制。HBV preS_2S蛋白含有丰富的T、B细胞抗原表位，可诱导产生广泛的抗HBV的免疫应答。本研究构建双表达单元载体Bicistronic，并将HCV C蛋白基因和HBV preS_2S蛋白基因或GM-CSF基因插入其中，制备双价基因免疫质粒，探索了双价基因疫苗免疫应答的规律以及GM-CSF对HCV C基因免疫的调节作用。 一、pcDNA3.0BA Bicistronic载体的构建 以pcDNA3.0为母载体先构建出MCS上酶切点不同的pcDNA3.0A和pcDNA3.0B。然后再组装成具有双CMV启动子的Bicistronic载体pcDNA3.0BA。 二、分泌型信号肽和跨膜蛋白基因修饰HCV C蛋白基因后对基因免疫应答的影响 化学合成HBVpreC基因，分别与HCV C69、C154和C191蛋白基因片段连接，其中pc69 C末端再连接上流感病毒跨膜蛋白TM基因，构建一系列真核表达载体。在Cos-7细胞中进行体外瞬时表达，经~(35)S代谢标记、免疫沉淀检测证实preC可将HCV C蛋白的C69和C154导出细胞外，对C191分泌作
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R392
【图文】：

载体的构建图1Figl.质粒PcNDA3.O的物理图谱及多克隆部位的限制性酶切位点PhysiealmaPofPeDNA3.0withMCS1.2酶类(l)内切酶:EcORI、比ndlll、介nl、助川1、氏ORV、BstXI、叱111、Pvtlll、Pstl、知al、知d、随Ul、Notl和Apal等购自华美公司、大连宝生物、Biolabs及promega公司;(2)修饰酶:T4DNA连接酶、DNA聚合酶1Klenwo片段、碱性磷酸酶等购自Biolbas及大连宝生物工程公司。1.3主要化学及生化试剂六细菌培养用胰化蛋白脉(bact--otPyrtnoe)、细菌培养用酵母提取物(脉t--oyeastext二)t细菌培养用琼脂(bact。一gaar)氨节青霉素溶液RNA酶A琼脂糖吸允idxoofidD1fico华北制药厂AmreseoB1owes七

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本文编号：2716184