人载脂蛋白AI抑制ox-LDL诱导转基因小鼠血管平滑肌细胞增生及脂质沉积分子病理学机制的研究

发布时间：2020-06-20 00:44

【摘要】：动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是冠心病和脑卒中发病的重要病理基础，心脑血管疾病是当前人类主要死因之一。对AS机制及防治的研究一直是科研及临床工作的重要课题。 多年的研究表明，AS基本病理损害是有免疫系统参与的慢性炎症反应。尤其是新近一些基因打靶小鼠的研究结果为了解免疫机制参与动脉粥样硬化发病过程提供了有力的依据。这些结果也为探讨AS的分子机制及防治途径提供了新的思路。AS是一种多基因病，其发病不但受外部环境危险因素的影响，更重要的是有内在基因表达异常。从分子水平上探究AS发生发展各环节中基因表达的变化，是目前研究AS发病机制和防治途径的基本思路。 氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)作为AS重要的促发因素一直倍受关注。与之相对应的是，大量证据表明高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)及其主要载脂蛋白ApoA-I具有抗AS作用。本实验室所建的重组h-apoA-I转基因C_(57)BL／6小鼠系，转入的h-apoA-I可通过常染色体稳定遗传，并可在多脏器(如：肝、肾、主动脉等)高效表达。已有工作分别从动物实验及细胞水平上证实这种小鼠是抗高脂及ox-LDL致AS的理想模型。为延续前述工作，比较原来对形成AS敏感的C_(57)BL／6小鼠在转入人apoA-I基因，血浆人ApoA-I水平明显升高并具有抗动脉内膜脂质沉积和粥样斑块形成的条件以后，和vSMC增生相关基因的变化，本实验试图筛选、克隆参与这一过程的相关基因，从分子生物学水平上探讨ox-LDL致AS及ApoA-I抗AS的机制。 本实验首先用PCR和Northern blot对用于取材的小鼠进行了鉴定，确认其有h-apoA-I整合并表达h-apoA-I mRNA，而后用改良贴块法原代培养其主动脉的平滑肌细胞，取传至第五代的vSMC为孵育对象。同时，以小鼠vSMC分裂指数最高为指标确定30μg／ml ox-LDL孵育三天为诱导激活条件。对以上述条件诱导激活的trvSMC用RT-PCR和Northern Blot证实有h-apoA-I基因表达的增加，进一步确认存在抗AS的保护性背景。而后采用新型减除杂交技术分离、克隆经上述条件诱导和非诱导vSMC
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R363

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本文编号：2721593