【摘要】：目的:间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是具有自我更新和多向分化潜能的组织干细胞,其主要来源骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)被认为具有潜在的细胞治疗价值,但在严重感染、骨髓肿瘤或随着年龄的增长骨髓细胞数及增殖、分化能力均明显下降的情况下,就无法满足临床需求,寻找丰富的、可储备的MSCs的新来源很有必要。本研究拟从人胎盘组织中分离培养获得人胎盘源间充质样干细胞(human placenta derived mesenchymal-like stem cells,HPMSCs),研究其生物学特性,以及移植治疗脑出血的可行性,并对治疗机制进行初步探讨。 方法:(1)将胎盘组织经酶消化和贴壁培养获得的细胞,用免疫荧光标记、流式细胞仪检测和免疫细胞化学的方法分析表型;将其与T淋巴细胞共培养,通过3H-TdR掺入,β液闪计数,分析其免疫源性;(2)采用叔丁对甲氧酚(butylated hydroxyanisole,BHA)、复方丹参注射液(dan-shen root parenteral solmion)、β-二巯基乙醇(β-dimersol,BME)等对培养的细胞向神经方向诱导分化,继而采用免疫细胞化学、RT-PCR/Real-time PCR等方法对分化的细胞进行鉴定;(3)利用自体未肝素化新鲜血回注法建立大鼠尾壳核出血模型,并将Hoechst33258体外标记的HPMSCs移植入大鼠尾壳核出血模型,荧光显微镜观察移植细胞的分布,用提高的躯体摆动实验(elevated body-swing test,EBST)和Bederson的4级评分标准进行模型的神经功能评价;(4)体外培养人胚胎来源的神经前体细胞(neural precursor cells,NPCs),分别用HPMSCs和人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,HBMSCs)培养上清对NPCs进行趋化实验,在用ELISA法检测HPMSCs培养上清中含基质细胞衍生因子-1alpha(stromal cell derived factor-1 alpha,SDF-1α)及用免疫荧光标记、流式细胞仪检测NPCs表达SDF-1α的唯一配体CXCR4的基础上,通过阻断试验证明HPMSCs及HBMSCs培养上清对NPCs的趋化作用是由这对分子介导的;用免疫荧光标记、流式细胞仪检测TNF-α和gp130信号激发对NPCs上CXCR4表达的影响,进
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R329.2;R651
【参考文献】
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本文编号：
2724522
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