丙型肝炎病毒E2基因的克

发布时间：2020-07-05 05:51

【摘要】：丙型肝炎病毒(HCV)包膜区E2基因变异较大，病毒侵入机体时，可逃避机体的免疫攻击，与HCV感染慢性化有关。包括高变区的E2蛋白含有中和性抗原表位，能诱导机体产生中和性抗体。因此对HCV包膜区基因结构特点及相应蛋白功能的研究，将有助于寻找HCV具有免疫保护作用的部位，对于研制疫苗及治疗用药、理解HCV感染后慢性化的机理以及HCV与宿主的相互作用均具有重要意义。本文选取HCV包膜区E2基因作为研究对象，进行了基因克隆、蛋白表达以及蛋白的免疫原性和模拟表位的研究。 一、HCV包膜蛋白E2基因的克隆与测序 从一名HCV感染者血清中提取病毒RNA，用随机引物反转录成cDNA，以半巢式PCR扩增出E2区基因，通过将基因克隆入原核表达质粒，筛选具有正确读码框架的E2区基因。序列测定结果表明我们克隆的基因为HCV 1b型包膜蛋白E2基因。 二、HCV包膜蛋白E2的表达与纯化 构建了一系列包膜蛋白E2基因的原核细胞表达质粒和真核细胞表达质粒。在大肠杆菌pQE30表达质粒中，表达了三种E2蛋白：P16、P30和P38。用Ni-NTA螯合亲和层析纯化了表达的蛋白，经酶联免疫吸附试验(ELISA)和蛋白印迹试验(Western Blot，WB)检测，纯化的蛋白可特异地与HCV感染者血清发生反应。在真核表达系统中，有部分E2蛋白得到了表达，大部分未发现蛋白的表达。 三、HCV包膜蛋白E2的免疫原性和模拟表位研究 利用纯化的包膜蛋白E2(P16)对HCV感染者进行了抗-E2抗体的筛查，阳性率为32.1％；利用质粒pCIHCVe2进行了包膜蛋白E2的基因免疫方面的研究，发现E2蛋白在诱发机体的体液免疫方面具有一定的作用；通过利用P16结合血清中的抗-E2抗体筛选了一个随机十二肽库，找到了一个模拟表位，可
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R373
【图文】：

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本文编号：2742185