新生隐球菌分子重组操作系统的建立及其荚膜相关基因的研究

发布时间：2020-08-02 20:31

【摘要】： 本文旨在建立新生隐球菌的基因克隆操作系统并对新生隐球菌的荚膜基因及其生理功能进行研究。研究工作包括：（1）用中断突变的方法在新生隐球菌的荚膜缺陷株C. neoformans cap60和cap70中分别构建成尿嘧啶合成基因URA5基因突变株（ura5~-)，经Southern分子杂交证明其含有URA5和G418两个选择标记，可作为高效转化受体菌；（2）构建了多个可以转化上述突变株的质粒，并筛选到高效转化质粒 pCXJ18，可以作为构建新生隐球菌文库的载体；（3）首次建立用于新生隐球菌的高效化学转化方法，转化效率达1-2×10~3／ugDNA。该方法的建立为筛选新基因打下了良好的基础；（4）用PCR扩增的方法成功地克隆到新生隐球菌荚膜基因CAP60，并将其分段亚克隆后与绿色荧光蛋白基因融合，为研究其功能创造了条件；（5）首次用载体pCXJ18 后成功地构建了新生隐球菌基因组文库，变今后克隆新基因奠定了基础；（6）利用新构建的基因转化新生隐球菌荚膜缺陷株cap70，初步结果表明，部分转化子能使乳胶凝集反应呈阳性，为进上步克隆库CAP70 基因创造了条件。新生隐球菌荚膜基因的研究目前在国外已取得了一定的进展，在国内几乎还是空白，而具有荚膜又是新生隐球菌的重要致病原因之一，因此对荚膜基因的研究成为提高诊断和治疗的必须。我们希望通过我们的工作为临床诊治新生隐球菌感染带来新的契机，并为进一步对新生隐球菌的致病机理研究及明确荚膜基因表达的生理生化过程打下基础。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R379.5

【共引文献】