人源性噬菌体抗体库与rhG-CSF基因工程ScFv抗体的研究

发布时间：2020-08-05 10:58

【摘要】：一、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的构建和鉴定 目的 构建抗rhG-CSF噬菌体抗体文库，以探索制备rhG-CSF病诊疗用单克隆抗体的新方法。方法用文库构建试剂盒，以健康人外周血淋巴细胞为材料，建立噬菌体抗体文库，并对其进行鉴定。结果 构建完成了一滴度为6.42×10~(10)cfu／ml的噬菌体抗体库。结论 rhG-CSF噬菌体抗体库的建立为对文库进行进一步的筛选、表达奠定了基础。 二、抗rhG-CSF噬菌体抗体库的筛选和阳性克隆的鉴定 目的 研制rhG—CSF的单链抗体。 方法 用rhG-CSF抗原包板，对己构建的抗rhG-CSF噬菌体抗体库进行3轮富集，然后用ELISA法从富集的次级抗体库中筛选阳性克隆，最后借助ELISA、SDS-PAGE和Western印迹等方法，根据克隆表达产物与其它4种抗原反应的情况，进行特异性鉴定。 结果 从随机挑取的80个克隆中筛选到阳性克隆6个，经交叉筛选和鉴定最终获得特异性抗rh6-CSF阳性克隆2个。 结论 用固相富集和ELISA筛选法可以从抗体库中有效地筛选到抗rhG-CSF的阳性克隆，获得的抗体克隆可用于抗rhG-CSF单链抗体的制备。 三、抗rhG-CSF噬菌体抗体基因结构分析 目的 对获得的抗rhG-CSF的抗体克隆进行基因分析。方法 将2株阳性克隆抗体基因进行测序，并用NCBI和Ig Blast Antibody of Immunoglobulin sequences中的软件，对DNA序列和由其推导的氨基酸序列进行分析，并对其二级结构进行了模拟。结果 G9和G32阳性克隆抗体基因的长度分别为708bp和732bp，轻链和重链可变区基因与人免疫球蛋白基因有高度的同源性。推导的氨基酸序列具有典型的抗体轻、重链可变区特征。对2株克隆抗体基因二级结构进行模拟，结果显示以β-折叠和转角为主的平行肽链形成片层样结构，均符合抗体的基本构型。结论 G9、G32阳性克隆外源基因均属于人免疫球蛋白可变区基因。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R392
【图文】：

图1.抗体的可变区片段示意图是在ScFv的一端加上一个双聚化结构，其中效果较好并已进行了体内应用研究的有Minibody。这是将19分子中的CH3拼接在ScFv的梭基端，通过CH3形成。、’、、

人源性抗体库制备及构建程序示意图

浙江大学博士学位论文5.3不经免疫制备抗体抗体库技术可以在体外模拟体内的抗体生成过辟了不经免疫制备抗体的新时代。体内抗体生成的关键有三点:多样细胞群体(Bcenrepertiore);克隆选择;亲和力成熟。抗体库技术的强大筛选能力和上节所述的抗体性能改良能力已基本解决了后两点，不经免疫制备抗体的关键就在于第一点:即构建性能优良的噬菌体抗这里需要考虑二个参数:大容量和多样性。Uf七邵d公成f:ila:mentou乌phage

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本文编号：2781452