尾加压素Ⅱ的心血管作用及机制研究

发布时间：2020-08-20 23:26

【摘要】： 尾加压素Ⅱ（urotensinⅡ，UⅡ）最初是从鱼尾部垂体分离出来的神经肽，为迄今所知缩血管作用最强的活性物质。研究发现UⅡ可能具有心血管和中枢神经调节作用，并提示UⅡ的心血管作用可能与NO有关。目前，研究已证实UⅡ的特异性受体为孤儿G蛋白偶联受体GPR14。但有关GPR14在大鼠心血管和脑组织的表达和分布以及UⅡ对心肌细胞的作用及其机制尚有争议。为进一步阐明UⅡ的心血管作用及其机制以及UⅡ受体GPR14在心血管和脑组织的表达与分布，本研究采用半定量逆转录-聚合酶链反应和原位杂交组织化学等技术，考察了受体GPR14在大鼠心血管组织及心肌细胞内的表达和分布；应用离体灌流大鼠心脏模型及蛋白印迹杂交等技术，观察了大鼠UⅡ对心脏的作用，初步探讨了其与NOS/NO合成系统的关系及机制；采用Bradford法和MTT法检测了UⅡ对心肌细胞总蛋白合成和细胞活力的影响，分析UⅡ诱导心肌细胞肥大作用，观察了UⅡ对心肌细胞NOS/NO合成系统的影响，初步探讨了UⅡ诱导心肌细胞肥大作用与NOS/NO合成系统的关系及可能机制；此外，还观察了受体GPR14在大鼠中枢神经系统内的表达和分布。本研究主要结果如下。 一、UⅡ受体GPR14 mRNA在大鼠心血管及心肌细胞的表达与分布 1． GPR14 mRNA在大鼠左心室、左心房、胸主动脉、颈总动脉等心血管组织有表达，其中左心室表达丰度最高。 2．GPR14 mRNA分布于大鼠心肌组织，阳性杂交信号主要位于心肌细胞胞浆。 3．原代培养的新生大鼠心肌细胞能表达GPR14 mRNA，阳性杂交信号主要分布于心肌细胞和成纤维细胞的胞浆。 二、大鼠UⅡ对离体灌流大鼠心脏的作用及其机制 1．分别给予离体灌流大鼠心脏6.66(10-5 、6.66(10-4、6.66(10-3、6.66(10-2和0.67μg的UⅡ5min后，冠脉流量由对照组的9.22±0.80分别增加至9.95±0.37、9.98±0.51、10.13±0.68、10.28±0.43和10.49±0.56 ml/min·g-1protein，呈剂量依赖性；给予6.66(10-2μg UⅡ，5min后冠脉流量最大，然后缓慢下降，但仍高于对照组；5、10、15、20、25和30min后，冠脉流量分别增加至10.28±0.43、9.71±0.30、9.60±0.47、9.48±0.56、9.29±0.46和9.27±0.77ml/min·g-1protein，WP=6呈时间依赖性。UⅡ能轻度增加灌流心脏的心率、LVSP和+dP/dtmax（P＞0.05），而LVDEP和-dP/dtmax则无显著性变化。 2． 单独给予NOS抑制剂L-NAME 30.6μg后，冠脉流量为7.90±0.84 ml/min·g-1protein；心率为193±19次/min；LVSP为9.19±0.78 kPa；+dP/dtmax为336±12kPa/s；L-NAME预处理20min后再给予UⅡ，冠脉流量、心率、LVSP和+dP/dtmax分别为8.65±0.56ml/min·g-1protein、201±11次/min、9.19±0.78kPa和344±26kPa/s，LVDEP和-dP/dtmax与UⅡ剂量为6.66(10-2μg组相比无显著性变化；NO供体SNP 3.38(103μg预处理20min后再给予UⅡ，冠脉流量、心率、LVSP、LVDEP和±dP/dtmax均无显著性变化。 3． 单独给予PKC激动剂PMA 0.70μg，心率为240±22次/min；PAM预处理20min后再给予UⅡ，心率增加至259±21次/min，而冠脉流量、LVSP、LVDEP和±dP/dtmax与UⅡ剂量为6.66(10-2μg组相比均无显著性变化。单独给予PKC抑制剂Stau 5.29(10-5μg，冠脉流量、LVSP和+dP/dtmax分别为7.90±0.43ml/min·g-1protein、10.21±0.84kPa和332±25kPa/s；Stau 5.29(10-5μg预处理20min后再给予UⅡ，冠脉流量、LVSP和+dP/dtmax分别为9.10±0.72 ml/min·g-1protein、10.45±0.94 kPa 和328±23 kPa/s，而心率、LVDEP和-dP/dtmax无显著性变化。 4．分别给予离体灌流大鼠心脏6.66(10-5 、6.66(10-4、6.66(10-3、6.66(10-2和0.67μg的UⅡ，心肌组织NOS活性由对照组的4.00±0.10分别增加为4.35±0.16、4.53±0.13、5.12±0.11、4.68±0.11和4.75±0.12nmol/min·mg-1protein。给予6.66(10-2μg 的UⅡ 5、10、15、30和45min后，NOS活性分别增加至4.78±0.13、5.15±0.20、5.34±0.12、4.85±0.16和4.54±0.12nmol/min·mg-1protein。L-NAME 30.6μg或Stau 5.29(10-5μg预处理20min再给予UⅡ，与UⅡ剂量为6.66(10-2μg组相比， 30min后NOS活性分别显著降低3.28±0.19和3.56±0.16 nmol/min·mg-1protein；而SNP或PMA预处理后，NOS活性则均无显著性变化。 5．分别给予离体灌流大鼠心脏6.66(10-5 、6.66(10-4、6.66(10-3、6.66(10-2和0.67μg的UⅡ30min，心肌eNOS含量分别增加（26.2±2.3）%、（55.8±4.8）%、（82.5±7.4）%、（96.2±7.8）%和（68.2±5.5）%；给予6.66(10-2μg 的UⅡ15、30和45min后，心肌eNOS含量分别增加（126.9±11.1）%、（96.2±7.8）%和WP=7（30.4±2.6）%。与UⅡ剂量为6.66(10-2μg组相比，30.6μg L-NAME或5.29(10-5μg Stau预处理20min后再给予UⅡ，eNOS含量分别下降至（39.4±3.5）%和（66.1±5.2）%；而SNP或PMA预处理后则对eNOS含量均无显著性变化。 三、大鼠UⅡ对新生大鼠心肌细胞的促肥大作用及其机制 1．给予UⅡ10-7mol/L直至5d后，细胞总蛋白质含量才由对照的130±15μg/ml显著增加至161±14μg/ml；分别给予10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L的UⅡ，光吸收度值可显示细胞线粒体内琥珀酸脱氢酶的活性从而反映
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R331.3
【图文】：

同组织及心肌细胞总 RNA 凝胶电l electrophoresis analysis of total R：left ventricle；Lane2：left atrium：thoratic aorta；Lane4：carotid ao：cardiomyocytes泳分析次数的凝胶电泳分析-2）显示在 30 次循环次数内，PC PCR 产物在 30 次内仍控制于指数

图 1-2 不同循环次数 β-actin PCR 产物凝胶电泳结1-2 Agarose gel electrophoresis analysis of β -actiin different cyclesLane1：40 cycles；Lane2：35 cycles；Lane3：30 cLane4：25 cycles；Lane5：20 cycles；Lane6：15 cLane7：DNA marker (Gene rulerTM100 bp DNA lad010203015 20 25 30 35 40CycleselativeRD(%)O

显示左心室表达丰度最高。见图 1-4 和表 1-1。bp 1 2 3 4 5 6 7 8 9图1-4 心血管系统 GPR14 mRNA表达的RT-PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳Fig1-4 Agarose gel electrophoresis analysisof GPR14 mRNA in cardiovasculature systemLane1：β- actin (carotid aorta)；Lane2：GPR14 (carotid aorta)；Lane3：β- actin（thoratic aorta）；Lane4：GPR14（thoratic aorta）；Lane5：DNA marker；Lane6：β-actin(left atrium)；Lane7：GPR14 (left atrium)；Lane8：β- actin (left ventricle)；Lane9：GPR14 (left ventricle)904—356—

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本文编号：2798581