口腔黏膜白斑恶变动物模型和细胞模型建立以及大学生复发性口腔溃疡的流行病学调查

发布时间：2020-08-26 04:59

【摘要】：目的：本项研究通过诱导建立口腔黏膜白斑恶变动物模型和细胞模型，为深入研究口腔黏膜白斑恶变的分子机制，实现口腔黏膜白斑恶变发生的早期预警、诊断及探寻有效阻断治疗靶点提供重要科学研究基础。方法：本项研究中动物模型的建立是采用0.5%苯并芘（Benzo(a)pyrene，BaP）/二甲基苯并蒽（7,12-dimethyl-benz[a]anthracene，DMBA）混合诱变剂溶解于丙酮和液体石蜡混合液中，于每周一、三、五固定时间涂擦于五周龄金黄地鼠左侧颊囊黏膜，分别于涂药第5周、9周、12周、15周分批处死地鼠，取地鼠左侧涂药部位颊囊黏膜或肿瘤组织，切取其中一部分采用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，做组织病理学诊断；其余部分立即置液氮中迅速冷却后转放于-80℃冰箱保存。阴性对照组则仅以溶剂丙酮和液体石蜡混合液涂擦地鼠颊囊，空白对照组不做任何处理，均于第15周处死后取地鼠颊囊黏膜。本项研究中细胞模型的诱导建立是以口腔黏膜白斑细胞（dysplastic oralkeratinocyte，DOK）为诱变对象，分别采用单一诱导剂BaP，DMBA,以及联合诱导剂BaP/DMBA，间断加药诱导体外培养的DOK细胞恶性转化。采用倒置相差显微镜观察诱导过程中细胞的形态变化，分别采用MTS法、软琼脂集落形成实验、裸鼠成瘤实验检测细胞诱导前后增殖速度、克隆形成率、细胞成瘤性的变化。结果： 1．以BaP/DMBA联合诱变剂涂擦金黄地鼠颊囊黏膜，经组织病理学诊断，颊囊黏膜经历炎症期、轻中度异常增生期、重度异常增生期（原位癌）、浸润癌过程。在诱变过程中地鼠黏膜组织多有白斑病变出现。阴性对照组和空白对照组颊囊黏膜均为正常黏膜的组织学表现。 2．DOK细胞经单一诱导剂BaP，DMBA,以及联合诱导剂BaP/DMBA间隔加药诱导后细胞形态由较为一致的立方形呈现不规则变化，体积变小；细胞生长速度明显加快（P＜0.05）；软琼脂集落形成实验结果显示Bap组，DMBA组,以及联合诱导剂BaP/DMBA组在软琼脂平板上均形成集落，DOK细胞无集落形成；裸鼠成瘤试验结果显示Bap组，DMBA组,以及联合诱导剂BaP/DMBA组细胞种植于裸鼠皮下30天后成瘤，肿瘤呈结节性迅速生长，部分见表面破溃出血，DOK细胞种植后未见成瘤。结论： 1．采用BaP/DMBA联合诱导金黄地鼠颊囊黏膜成功建立口腔黏膜白斑恶变动物模型。 2．采用单一诱导剂Bap，DMBA以及联合诱导剂BaP/DMBA诱导DOK细胞成功建立口腔黏膜白斑恶变细胞模型。目的：进行大学生复发性口腔溃疡的流行病学调查，为复发性口腔溃疡的防治提供科学依据。方法：大连理工大学部分学生共570例，其中男性457例，女性113例，采用问卷调查的方法详细记录受检者性别、年龄、城乡生源、口腔溃疡的发作部位和大小等情况。将所得资料分别以性别、年龄、城乡生源、溃疡部位作为分组条件进行统计分析，并比较各组差异。结果： 1.复发性口腔溃疡的患病率为63.16%。 2.以性别作为分组条件，比较男女之间复发性口腔溃疡患病率差异，结果无统计学意义（P＞0.05）；比较男女之间重型口疮和轻型口疮的构成比差异，结果无统计学意义（P＞0.05）。 3.以城乡生源作为分组条件，比较城乡之间复发性口腔溃疡患病率差异，结果无统计学意义（P＞0.05）；比较城乡之间重型口疮和轻型口疮的构成比差异，结果无统计学意义（P＞0.05）。 4.以年龄作为分组条件，比较18-20岁组、21-23岁组和24岁以上组三个年龄组间复发性口腔溃疡患病率，结构差异无统计学意义（P＞0.05）；比较三组间重型口疮和轻型口疮的构成比差异，结果有统计学意义（P＜0.05）。进一步两两比较，发现24岁以上组重型口疮和轻型口疮的构成比与其他两个年龄组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）；18-20岁组和21-23岁组重型口疮和轻型口疮的构成比差异无统计学意义（P＞0.05）。 5.复发性口腔溃疡多发生在唇、颊黏膜、唇沟和舌四个部位，不同发病部位之间轻型口疮和重型口疮的构成比差异有统计学意义（P＜0.05）；进一步两两比较，发生在唇的重型口疮和轻型口疮的构成比与分别与发生在唇沟和舌的构成比进行比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；发生在唇与颊黏膜的重型口疮和轻型口疮的构成比差异无统计学意义（P＞0.05）；发生在颊的重型口疮和轻型口疮的构成比分别与发生在唇沟和舌的构成比进行比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；发生在唇沟的重型口疮和轻型口疮的构成比与舌的构成比进行比较，差异有统计学意义（P＜0.05），重型口疮在上述四个部位的发生率由高到低为舌＞唇＝颊黏膜＞唇沟。结论： 1.复发性口腔溃疡的患病率为63.16%。 2.复发性口腔溃疡的患病率和构成比均与性别和城乡生源无关。 3.复发性口腔溃疡的患病率与年龄无关，复发性口腔溃疡中重型口疮和轻型口疮的构成比与年龄有关，24岁以上组重型口疮的发生率高于其他两个低年龄组。 4.复发性口腔溃疡多发生在唇、唇沟、颊黏膜和舌四个部位，重型口疮的发生率由高到低为舌＞唇＝颊黏膜＞唇沟。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;R781.5
【图文】：

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图 1 空白对照组黏膜大体照片图 2 阴性对照组黏膜大体照片注：1 为第 5 周，2 为第 9 周，3 为第 12 周，4 为第 15 周图 3 BaP/DMBA 联合组黏膜照片（二）组织病理学诊断1、空白对照组：正常地鼠黏膜是由 4-6 层细胞构成的角化复层鳞状上皮，细胞排列整齐，无上皮钉突或钉突不明显。基底层细胞明显，上皮和肌层之间为薄层结

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8注：1 为第 5 周，2 为第 9 周，3 为第 12 周，4 为第 15 周图 3 BaP/DMBA 联合组黏膜照片（二）组织病理学诊断1、空白对照组：正常地鼠黏膜是由 4-6 层细胞构成的角化复层鳞状上皮，细胞排列整齐，无上皮钉突或钉突不明显。基底层细胞明显，上皮和肌层之间为薄层结缔组织，有少量散在的纤维细胞和血管，类似人类正常黏膜。2、阴性对照组：组织病理学表现与空白对照组相似，呈角化复层鳞状上皮，各层细胞排列规则，为正常黏膜的组织学表现，结果见图 4。

【参考文献】