遗传性乳光牙本质致病基因的鉴定和Dspp基因敲除小鼠的建立

发布时间：2020-08-26 17:48

【摘要】：遗传性乳光牙本质(dentinogenesis imperfecta type Ⅱ，DGI-Ⅱ)是一种常染色体显性遗传病。发病率为1／6，000-8，000．患者的乳牙和恒牙都受到影响。受累的牙齿呈乳白色光泽，髓室和根管变窄甚至完全闭锁。患者牙齿的牙釉质很容易从牙本质上脱落，使本来就发育不良的牙本质过度磨损，导致患者牙齿显著变短。结果，遗传性乳光牙本质患者不得不接受广泛的牙齿护理和昂贵的治疗。牙本质的无机成分主要为羟基磷灰石晶体，有机成分主要为胶原纤维，非胶原蛋白质包括分泌型焦磷酸蛋白(secreted phosphoprotein 1，SPP1)，牙本质基质蛋白1 (dentin matrix protein 1，DMP1)，牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein，DSP)、牙本质磷蛋白(dentin phosphoprotein，DPP)和骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein，IBSP)等。其中DPP约占非胶原蛋白质的50％，它是一个高度磷酸化的蛋白质，被认为在羟基磷灰石晶体的形成中有重要作用。DSP和DPP是由一个基因DSPP编码的。一般认为DSPP基因的表达具有牙齿特异性，它只在成牙本质细胞中表达和成釉质细胞中短暂表达。遗传性乳光牙本质的致病基因已被定位在染色体4q21上的2 MB的范围内，在此范围内有一个与组织矿化过程有关的基因簇。SSP1、DMP1、DSPP和IBSP都位于此基因簇中。但是，SPP1，DMP1和IBSP都被排除了作为DGI-Ⅱ的侯选基因。天津医科大学口腔医院在临床中发现一个遗传性乳光牙本质家系。我们选取染色体4q21上的8个短串联重复序列多态性标记(short tandem polymorthisms，STRPs)，经荧光标记PCR，等位片段分析，用Linkage软件包MLINK软件对所采用的STRPs与此DGI-Ⅱ家系致病位点进行2点连锁分析。连锁分析结果支持此家系的致病基因位点位于染色体4q21上。接着我们选取DSPP基因做突变分析，通过直接测序法
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R-332;Q789
【图文】：

遗传性乳光牙本质,家系,光片,牙齿

此家系5代，现存活受累者巧名。患者的牙齿呈乳白色光泽，并且由于过度磨损显著变短，严重者甚至达到牙脊槽水平。X一光片显示受累牙齿的牙髓腔明显变窄、甚至闭锁(图2)。舀入2甘，v:一丫sv‘v7v.诊图1遗传性乳光牙本质家系提取个体111:1，111:2，IV:2，IV:3，IV:4，IV:5，v:2

等位片段,扫描分析,染色体4

我们选取染色体4qZI上的8个STRPs做连锁分析。8个ST即s的荧光标记PCR产物经PerkinElmerABI377电泳，GENESCAN软件分析处理后，得到ST即s等位片段的扫描图谱及片段长度(图3)。图3部分ST即s等位片段扫描分析Fig.3ApartialsT即5naalysisbygenescan

序列,终止密码子,基因突变,密码子

测序结果显示受累个体刀决孕基因第3658位核营酸C突变成T(位置的编码依照公开发表的序列，AF163151)，导致第三外显子的最后一个密码子突变为终止密码子，既Gln45sotp(图6)。这一突变只存在于DGI一H家系的受累个体中，在DGI一11家系非受累个体或无关正常个体中都不存在。图6直接测序法分析DS尸尸基因突变注意C一T的突变导致编码Gln45的密码子变成了终止密码子。Fig.6SequeneenaalysisofDSPPshowingtheC峥TtrnasitionwhiehProdueestheGln45stoPmutation.为了进一步确定此突变，我们又用限制性内切酶法进行了鉴定。以基因组DNA为模板，用引物E34ofut先做第一轮PCR反应，然后取第一轮PCR产物为模板，办用引物E34hn进行第二轮PCR反应。最终的PCR产物用限制性内切酶Rasl进行酶切分析。在受累个体中，由于第3658位的C一T突变破坏了限制性内切酶Rsal的识别位点，Rsal将不能切割PCR产物

【共引文献】