树突状细胞抗乙肝病毒免疫和抗肝癌免疫

发布时间：2020-08-31 15:59

　　 目的 研究人外周血单核细胞来源的树突状细胞（Dendritic cells，DC） 体外诱导、扩增方法以及生物学特性，进一步在体外和动物模型上研 究DC在抗乙肝病毒和肝癌免疫中的作用，为DC疫苗在临床上的应用提 供理论依据。 方法 1．人外周血单核细胞来源的树突状细胞体外诱生方法和生物学特性 1．1 从健康人外周血中分离出单核细胞，在rhGM-CSF和rhIL-4的 作用下培养7-22天，并通过形态学观察、FACS分析（检测DC 表面特异性标记CDla及DC功能相关分子HLA-ABC、HLA-DR、 CD40、CD86的表达）和混合淋巴细胞反应进行鉴定。 1．2 EBV感染PBMC建立EBV转化的B淋巴母细胞系，用该细胞和DC 负载抗原后刺激自体淋巴细胞的增殖效应来比较两种细胞的抗 原提呈能力。 2．DC抗乙肝病毒免疫 2．1 取正常人和慢性乙肝病人的外周血，按前述方法诱导扩增出DC， 并用流式细胞仪检测CD40表达情况。 重庆医科人学博卜学位论义 2．2检测乙肝表面抗原＊BSAg）负载的 DC刺激自体淋巴细胞增殖 效应。 2．3用PLXSN＊真核表达载体转染HepGZ 细胞，建立表达HBsAg的 。靶细胞摸型；检测DC诱寺的HBsAg特并性CTI。对HePGZ—S细胞 的杀伤效应。 2．4用HBsAg特异性CTL与HepG。＊细胞同时接种BALB／C裸鼠或用 HBsAg特异性CTL治疗HepG。上荷瘤裸鼠模型，观察肿瘤的发生 和生长情况u瘤大小用最大径与最小径的乘积来表示，nz）。 3．DC抗肝细胞癌免疫 3．l 从健康人外周血中分离出单核细胞，在rhG卜CSF和 rhIL叫或 rhGM｛SF作用下培养7天，分别诱导出同一个体来源的DC和巨 噬细胞＊巾人 用肿瘤抗原负载的细胞刺激自体淋巴细胞增殖 效应来比较两种细胞对肝癌细胞抗原＊）的提呈作用。 3．2 DC体外激活产生肿瘤特异性CTL并检狈对CTL对HepGZ 细胞的 杀伤效应。 3．3用HepGZ细胞接种于裸鼠背部皮下，建立肝癌细胞荷瘤裸鼠模 型：OC激活的肿瘤特异性CTL和LAK细胞分别对He＊2荷瘤裸 e 鼠模型进行治疗，比较它们的治疗效果。 结果 1．人外周血单核细胞来源DC的鉴定和生物学特性 1．1 在枷｛SF和IL、作用－卜，培养7天即可诱导出典型的＊。经 3 罩庆医科大学博I＿学位论义 ＊W 光学显微镜和电镜观察及流式细胞仪分析证实，所诱导的细胞 具有典型DC 的形态学和结构特征；表达DC特异性表面标记 CDla，同时高表达功能十关分于HI。A－ABC、HLA－DR，CD40于 CD86； ．混合淋巴细胞反应的检测表明，DC具有较强的刺激同种淋巴细 胞反应的能力。 1．2负载抗原的DC刺激自体淋巴细胞增殖的能力强于朋V转化的淋 巴母细胞，说明DC具有更强的抗原提呈能力。 2．DC抗乙肝病毒免疫 2．IHBSAg负载的m不仅诱导自体淋巴细胞增殖，而且其激活的 HBSAg特异性CTL具有很强的杀伤效应，杀伤率为85．l巩 2．2在接种后的 22大内，预防接种组荷瘤率为 20％门乃），而对照 组为90％（9／10），有显著性差异（g（。05）；DC激活的HBSAg 特异性CTL对HepG厂S荷瘤鼠模型有治疗作用，在接种后的38 大内，治疗组肿瘤明显比对照组小，有显著性差异k们．05）， 而且治疗组有 3只荷瘤鼠肿瘤消退“0们。 3．DC抗肝细胞癌免疫 3．1被肝癌细胞抗原致敏的队或M巾有显著刺激自体淋巴细胞增殖 元 效应，而以DC的刺激能力更强c 3．2 DC激活的肿瘤特异性 CTL具有很强的杀伤效应，杀伤率为 71．6耿 3．3 DC激活的肿瘤特异性 CTL有抑制肿瘤生长的作用，明显强于 LAK 细胞的治疗效果b州．05人 4 重庆医科大学博十学位论文 结论 1．人外周血单核细胞在GM｛SF和 IL个的诱导下，可以分化为典型的 树突状细胞，并具有较强的抗原提呈功能。 2．立表达HBSAg的肝癌细胞荷瘤裸鼠模型，通过观察HBSAg
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2001
【中图分类】：R392.12;R73-36

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 韩清珍;仝佳;赵阳;刘嫣芳;沈培;苏兆亮;邵启祥;焦志军;王胜军;许化溪;;产丙酮酸棒状杆菌及痤疮丙酸杆菌对树突状细胞的免疫调节作用[J];免疫学杂志;2011年07期

2 董伟;唐彦君;刘宁;;植物乳杆菌胞外多糖对小鼠树突状细胞分泌的调控[J];中国乳品工业;2011年06期

3 佘志成;范红结;李春玲;王贵平;贾爱卿;杨冬霞;;副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5对豚鼠树突状细胞成熟及功能影响[J];畜牧兽医学报;2011年07期

4 张丽;石玮;张雷;李杰;李娜;安鹏丽;张悦;王蓓;孟明;王家鑫;;负载灭活口蹄疫病毒树突状细胞启动的CD4~+T细胞应答[J];中国兽医科学;2011年07期

5 葛长勇;孙茂盛;;乙型肝炎病毒免疫逃避机制研究进展[J];云南大学学报(自然科学版);2007年S3期

6 赵萌;徐青;于继云;余云舟;;一种拮抗HIV-1并靶向DC的融合基因的设计及表达鉴定[J];生物工程学报;2011年08期

7 石晓月;贺敏;任鹏;宋丽雅;乔志新;杨晓琮;程宏;冯秋月;张公庆;王璇琳;宫宁;王字玲;李伟静;于群;;慢病毒介导的稳定表达人GM-CSF、IL-4的EA.hy926细胞株的建立[J];生物技术通讯;2011年04期

8 李晓艳;王景龙;张瑞;孙春辉;郎需龙;杨艳玲;屈海龙;赵勇坤;王兴龙;;羊布氏菌强毒株16M感染小鼠骨髓树突状细胞模型的建立[J];中国生物制品学杂志;2011年08期

9 梁俊容;景怀琦;;耶尔森菌抵抗宿主免疫并诱导吞噬细胞凋亡机制研究[J];中国人兽共患病学报;2011年08期

10 贾志龙;毛中鹏;;胸腺基质淋巴生成素的研究现状[J];武警医学院学报;2011年06期

相关会议论文 前10条

1 刘修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度树突状细胞培养鉴定[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年

2 张庆红;胡玉珍;吕顺艳;钟延清;;雌激素影响大鼠树突状细胞的分化、成熟和功能[A];中国生理学会第六届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2003年

3 郭大伟;梁健;姜晓峰;王学范;魏云涛;姜洪磊;;GPC3基因转染的树突状细胞诱导抗肝癌HepG2细胞杀伤作用的研究[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

4 张新华;钟翠平;顾云娣;顾晓;范强;王国强;周播江;;TGF-β1基因转染树突状细胞增强移植心脏耐受性并降低Fractalkine的表达[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

5 于益芝;刘书逊;王文雅;张明徽;郭振红;徐红梅;齐润姿;安华章;曹雪涛;;TRAIL在树突状细胞杀伤活化T细胞中的作用[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

6 尤长宣;罗荣城;张军一;苏瑾;廖旺军;郑航;Paul L Hermonat;;基因转移制备树突状细胞的实验研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

7 葛长勇;李鸿钧;孙茂盛;冯婷婷;靳昌忠;姚航平;吴南屏;;灭活SV40致敏的猴树突状细胞的生物学特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年

8 葛长勇;李鸿钧;谢天宏;张光明;易山;孙茂盛;吴南屏;;恒河猴树突状细胞的生物学特性研究[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年

9 张尧;靳风烁;兰卫华;李彦峰;张克勤;吴刚;叶锦;;联合应用塞莱西布和CpG-ODN对树突状细胞功能的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

10 夏强;刘卫彬;陈振光;张莹;黄如训;;胸腺成熟树突状细胞与重症肌无力发生的相关性分析[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 章静波;干细胞研究新动向[N];健康报;2009年

2 王雪飞;树突状细胞“面目”更清晰[N];健康报;2004年

3 记者 白毅;间充质干细胞可促进成熟树突状细胞增殖分化[N];中国医药报;2009年

4 刘伯宁;乔布斯的错误与斯坦曼的自我试验[N];南方周末;2011年

5 方彤;树突状细胞瘤苗新进展[N];健康报;2006年

6 本报记者 沈湫莎;这一次,诺奖会不会颁给逝者[N];文汇报;2011年

7 张献怀;树突状细胞疗法治疗恶性黑色素瘤[N];中国医药报;2004年

8 记者　毛黎;美发现一种“超级”形态酶[N];科技日报;2006年

9 杨淑娟;美研究出新型丙型肝炎疫苗[N];中国医药报;2006年

10 ;慢性HBV感染使树突状细胞功能受损[N];中国医药报;2006年

相关博士学位论文 前10条

1 李用国;树突状细胞抗乙肝病毒免疫和抗肝癌免疫[D];重庆医科大学;2001年

2 潘建平;γ-干扰素对树突状细胞分化和功能成熟的调控及其基因修饰的树突状细胞抗肿瘤免疫机制研究[D];浙江大学;2002年

3 朱伟国;PPAR-γ激动剂吡格列酮抑制血管紧张素Ⅱ诱导树突状细胞免疫激活致动脉粥样硬化斑块不稳定的研究[D];浙江大学;2010年

4 王正昕;肿瘤微环境中浸润性树突状细胞的表型和免疫学功能的研究及其临床意义[D];第二军医大学;2000年

5 周向阳;新型热休克蛋白HSP-DC激活树突状细胞及其佐剂效应研究[D];第二军医大学;2003年

6 赵鸿;未成熟树突状细胞联合骨髓移植诱导大鼠异体肾移植免疫耐受的研究[D];复旦大学;2003年

7 陈玉丙;树突状细胞抗原负载及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大学;2004年

8 王宏伟;肺间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的免疫激活与免疫耐受作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年

9 赵毅;青藤碱对RA患者树突状细胞免疫功能的影响及机制研究[D];第一军医大学;2007年

10 刘海波;Fas信号激活树突状细胞炎性复合体形成的生物学意义与分子机制研究[D];第二军医大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 吴鸣宇;黑色素瘤基因（MAGE-1）相关肽负载树突状细胞对肝癌细胞杀伤作用的实验研究[D];苏州大学;2003年

2 茹颖;树突状细胞在IgA肾病和系统性红斑狼疮发病机制中的作用[D];北京协和医学院;2011年

3 孟冬梅;急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究[D];青岛大学;2003年

4 梁军利;IFN-β1a对多发性硬化树突状细胞分泌的细胞因子影响的研究[D];广西医科大学;2010年

5 黄祺琦;耐受性树突状细胞来源的exosome治疗小鼠免疫介导性再生障碍性贫血的实验研究[D];南昌大学;2010年

6 初晓霞;淋巴瘤树突状细胞的表达与临床分期、恶性度及预后的相关性研究[D];青岛大学;2002年

7 刘丽燕;MyD88在OK-432诱导树突状细胞成熟中的作用[D];福建医科大学;2010年

8 孟松;IL-10处理的树突状细胞分泌的exosomes对实验性大鼠肠炎的治疗作用[D];南京医科大学;2010年

9 王茜;调节性树突状细胞对CD8~+T细胞的负向调节作用[D];泰山医学院;2010年

10 郭佳;TLR配体诱导骨髓来源树突状细胞获得产生全反式维甲酸的能力[D];浙江大学;2011年

本文编号：2809021