端粒蛋白Tankyrase和TRF1的研究

发布时间：2020-09-02 11:23

　　 衰老,同生长一样,是细胞的重要生命现象之一。端粒具有稳定染色体的功能,端粒长度是控制细胞衰老的“分子钟”,是细胞衰老、死亡和癌变的重要标志。 端粒酶和端粒蛋白对端粒长度具有调节作用。人端粒结合蛋白(telomere repeat binding factor1, TRF1)能够以二聚体的形式通过其羧基端的myb结构域与端粒DNA结合。强化端粒的有序结构,使其处于一种“关闭”状态,导致端粒酶无法接近端粒末端发挥作用。过表达的TRF1能使端粒长度逐渐缩短,它是端粒长度的负调节因子。同时,长期过表达的端锚聚合酶(TRF1-interacting, ankyrin-related ADP-ribose polymerase, tankyrase)与TRF1分子结合后,通过其PARP活性对TRF1进行聚ADP-核糖基化修饰,阻断TRF1与端粒DNA的结合,从而解除TRF1对端粒长度的抑制作用,使端粒处于一种“开放”的状态,使端粒长度逐渐延长。因此tankyrase酶活性的调节及其与TRF1的相互作用可能是细胞内调控端粒长度的重要方式。 TRF1具有核定位信号。是一个典型的核蛋白,而tankyrse则在胞浆和胞核都有分布,并且它在胞核的分布依赖于TRF1。它们是通过什么机制精细地调节端粒的长度?这一过程中是否还有其它分子对它们进行修饰或调控?如果抑制tankyrase的蛋白表达水平,封闭其功能,阻断它与TRF1之间的相互作用。是否会强化TRF1对端粒长度的负向调控功能?反之,如果抑制TRF1的表达水平是否会强化tankyrase的功能或是因为tankyrase的入核能力降低而削弱它的正向调节能力?所有的这些情况又将对细胞生长、端粒长度和细胞衰老产生怎样的影响? 为了对上述问题进行深入研究。我们的工作获得如下结果: 1.通过RT-PCR从HeLa细胞中克隆得到TRF1蛋白编码基因,诱导表达了带His-tag的TRF1融合蛋白,用纯化重组蛋白作为免疫原制备的兔抗血清能够用于Western-blot和免疫荧光细胞染色检测多种哺乳动物细胞内源性TRF1分子。 2.通过稳定过表达与tankyrase结合的TRF1氨基端68个氨基酸序列,建立了负显性抑制tankyrase胞核功能的细胞模型。
【学位单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R341

【参考文献】

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本文编号：2810530