BCL10激活转录及其介导细菌脂多糖和TCR信号通路的机制研究
发布时间：2020-09-14 15:26
一、BCL10同Pellino2的相互作用参与介导TLR4通路 先天免疫又称固有免疫或天然免疫,是机体防御病原体的第一道防线。在先天免疫系统中,不同吞噬细胞如嗜中性粒细胞和树突细胞等通过来自Toll样受体(TLR)的信号而辨别出病原体及“自己”。在启动先天免疫对抗病原体的过程中最重要的一步就是识别,由杀伤细胞的受体识别存在于病原体而不存在于细胞中的成分,称为病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)。不同的TLR识别的PAMP不同,例如TLR4可以识别革兰氏阴性菌的LPS。在这里,我们证明T细胞和IκB激酶复合体间的重要信号分子BCL10与先天免疫系统有关,并参与了TLR4途径及核因子κB(NF-κB)的激活。在受到微生物脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的刺激后,BCL10被招募到TLR4信号复合物上并与Pellino2结合。 Pellino蛋白在TLR信号亚通路的建立和维持中发挥着重要的作用。Pellino2是一个新的信号传导分子。近期研究表明外源鼠pellino2反意(antisense)重组表达能抑制LPS诱导的NF-κB的活化。为找到BCL10相关的信号转导途径的成员,我们用T7 Select噬菌体展示技术分别从肺及肝癌cDNA文库中筛选到6个阳性克隆,其序列编码人的Pellino2 cDNA的部分片段。在LPS刺激的巨噬细胞中,BCL10同Pellino2的体内相互作用通过免疫共沉淀技术得到证明,同时,我们发现Pellino2蛋白的169～233氨基酸区参与介导与BCL10相互作用。为进一步研究Pellino2在BCL10依赖的信号转导途径中的作用,我们通过siRNA重组质粒pSUPER-Pellino2构建了Pellino2表达沉默的细胞系。在该细胞系中,我们发现LPS诱导或BCL10过表达所引
【学位单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R392
【部分图文】：
图1.1CBL10与其相关蛋白的结构比较(Thome:BCL10)1.2BCL10的功能1.2.1BCLIO能诱发细胞凋亡与滤泡B细胞非何杰金氏淋巴瘤中belZ基因转位t(14;18)(q32;q31)相并且通过对E10功能的预测〔Hofmnanetal.，1997」，本以为BCL10蛋白的功抑制细胞凋亡，但当其转染293细胞时却诱发细胞凋亡，在其他细胞系CO--S7和中，BCLIO也能诱发细胞凋亡。野生型BCL10过量表达时能诱发细胞凋亡，其C端截短突变体丧失凋亡诱力，但能激活NF一KB，而CARD截短突变体则丧失凋亡诱发和激活NF一B的能进一步探测BCL10突变体的功能。利用RT一PCR和克隆PCR产物的DNA测序分析，S1个克隆中，两个是正常的，其他16个在BCLIO的编码区发生突变，大部分于胸腺喷陡T的插入而产生的截短突变，主要是两种BCLIO截短突变MIO6和M，
图1.4pG/BCL10和pATCZ一AD的共转化菌落〔Chengetal.，2003〕图1.5pG/BCllo转化菌落在缺陷性培养基SD产TPr一His上的生长及p一半乳糖昔酶活力测定〔Chengetal.，2003〕虽然他们初步证明了bc刀O基因产物可以激活报道基因的表达，但酵母其他因素产生的本底，也未排除条件差异产生的假象。为了确证BCL个转录激活因子的可能性，他们又采用了不同的培养基和不同的重组质的转录激活效应进行进一步的检验。为了排除lue基因表达对报到基因的激活作用，除三缺(DS产Trp一Le。一HIS)，还用了仅缺TPr的培养基(sD产Trp)和酵母的YPD，因为与二缺平板的结果相同，所以结果未显示。同时以质粒SH140作为阴性和阳性对照进行月一半乳糖普酶活力测定，实验结果见图1.6。图含有阴性(SH1406)和阳性(pCL2)质粒的酵母菌株在二种酵母菌中均结果，只要含有b打/O基因的质粒，不管是单独存在，还是与pACTZ一AD活道因lacz的表达。母，GAL4是UAS(U
图1.4pG/BCL10和pATCZ一AD的共转化菌落〔Chengetal.，2003〕图1.5pG/BCllo转化菌落在缺陷性培养基SD产TPr一His上的生长及p一半乳糖昔酶活力测定〔Chengetal.，2003〕虽然他们初步证明了bc刀O基因产物可以激活报道基因的表达，但酵母其他因素产生的本底，也未排除条件差异产生的假象。为了确证BCL个转录激活因子的可能性，他们又采用了不同的培养基和不同的重组质的转录激活效应进行进一步的检验。为了排除lue基因表达对报到基因的激活作用，除三缺(DS产Trp一Le。一HIS)，还用了仅缺TPr的培养基(sD产Trp)和酵母的YPD，因为与二缺平板的结果相同，所以结果未显示。同时以质粒SH140作为阴性和阳性对照进行月一半乳糖普酶活力测定，实验结果见图1.6。图含有阴性(SH1406)和阳性(pCL2)质粒的酵母菌株在二种酵母菌中均结果，只要含有b打/O基因的质粒，不管是单独存在，还是与pACTZ一AD活道因lacz的表达。母，GAL4是UAS(U
本文编号：2818338
【学位单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R392
【部分图文】：
图1.1CBL10与其相关蛋白的结构比较(Thome:BCL10)1.2BCL10的功能1.2.1BCLIO能诱发细胞凋亡与滤泡B细胞非何杰金氏淋巴瘤中belZ基因转位t(14;18)(q32;q31)相并且通过对E10功能的预测〔Hofmnanetal.，1997」，本以为BCL10蛋白的功抑制细胞凋亡，但当其转染293细胞时却诱发细胞凋亡，在其他细胞系CO--S7和中，BCLIO也能诱发细胞凋亡。野生型BCL10过量表达时能诱发细胞凋亡，其C端截短突变体丧失凋亡诱力，但能激活NF一KB，而CARD截短突变体则丧失凋亡诱发和激活NF一B的能进一步探测BCL10突变体的功能。利用RT一PCR和克隆PCR产物的DNA测序分析，S1个克隆中，两个是正常的，其他16个在BCLIO的编码区发生突变，大部分于胸腺喷陡T的插入而产生的截短突变，主要是两种BCLIO截短突变MIO6和M，
图1.4pG/BCL10和pATCZ一AD的共转化菌落〔Chengetal.，2003〕图1.5pG/BCllo转化菌落在缺陷性培养基SD产TPr一His上的生长及p一半乳糖昔酶活力测定〔Chengetal.，2003〕虽然他们初步证明了bc刀O基因产物可以激活报道基因的表达，但酵母其他因素产生的本底，也未排除条件差异产生的假象。为了确证BCL个转录激活因子的可能性，他们又采用了不同的培养基和不同的重组质的转录激活效应进行进一步的检验。为了排除lue基因表达对报到基因的激活作用，除三缺(DS产Trp一Le。一HIS)，还用了仅缺TPr的培养基(sD产Trp)和酵母的YPD，因为与二缺平板的结果相同，所以结果未显示。同时以质粒SH140作为阴性和阳性对照进行月一半乳糖普酶活力测定，实验结果见图1.6。图含有阴性(SH1406)和阳性(pCL2)质粒的酵母菌株在二种酵母菌中均结果，只要含有b打/O基因的质粒，不管是单独存在，还是与pACTZ一AD活道因lacz的表达。母，GAL4是UAS(U
图1.4pG/BCL10和pATCZ一AD的共转化菌落〔Chengetal.，2003〕图1.5pG/BCllo转化菌落在缺陷性培养基SD产TPr一His上的生长及p一半乳糖昔酶活力测定〔Chengetal.，2003〕虽然他们初步证明了bc刀O基因产物可以激活报道基因的表达，但酵母其他因素产生的本底，也未排除条件差异产生的假象。为了确证BCL个转录激活因子的可能性，他们又采用了不同的培养基和不同的重组质的转录激活效应进行进一步的检验。为了排除lue基因表达对报到基因的激活作用，除三缺(DS产Trp一Le。一HIS)，还用了仅缺TPr的培养基(sD产Trp)和酵母的YPD，因为与二缺平板的结果相同，所以结果未显示。同时以质粒SH140作为阴性和阳性对照进行月一半乳糖普酶活力测定，实验结果见图1.6。图含有阴性(SH1406)和阳性(pCL2)质粒的酵母菌株在二种酵母菌中均结果，只要含有b打/O基因的质粒，不管是单独存在，还是与pACTZ一AD活道因lacz的表达。母，GAL4是UAS(U
【引证文献】
相关硕士学位论文 前1条
1 孙柏;鸡Bcl10基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2010年
本文编号：2818338
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/2818338.html
最近更新
教材专著
