小鼠卵巢及早期胚胎天然抗病毒机制

发布时间：2020-09-27 12:36

【摘要】：背景与目的：多种病毒可以感染卵巢,影响卵巢功能。而且一些病毒如乙型肝炎病毒(HBV)、及艾滋病毒(HIV)等可能通过感染卵细胞和胚胎而直接传播给后代。然而卵巢、卵细胞及胚胎的天然抗病毒机制,尚未研究。本论文旨在分析模式识别受体介导的卵巢及早期胚胎的天然抗病毒反应。 材料与方法：免疫组化和Western blotting方法用于蛋白的定位与定量分析。Real-time RT-PCR用于分析mRNA表达水平分析。ELISA方法用来分析细胞因子的浓度。分离小鼠颗粒细胞、卵细胞、卵黄囊细胞,通过转染Poly(I:C)模拟病毒感染,分析细胞的天然抗病毒反应。 结果：病毒RNA模式识别受体TLR3、MDA5、RIG-1在卵巢颗粒细胞与间质细胞中表达。Poly(I:C)可以诱导颗粒细胞的天然抗病毒反应,包括上调TNF-α、IL-6、 IFN-α、IFN-β等炎症因子,以及抗病毒蛋白ISG15、OAS1、Mx1的表达。抑制TLR3、MDA5、RIG-I中任一个受体表达显著地降低了上述反应。颗粒细胞的抗病毒反应干扰雌激素的合成。而且MDA5、RIG-I表达于卵母细胞及成熟的卵细胞,Poly(I:C)诱导卵细胞抗病毒蛋白ISG15、OAS1表达上调。在胚胎发育早期,TLR3、MDA5、RIG-I受体特异表达于卵黄囊细胞,Poly(I:C)可诱导卵黄囊细胞产生天然抗病毒反应。Poly(I:C)诱导的天然抗病毒反应需要TLR3、MDA5、RIG-I受体介导的核转录因子κB(NF-κB)与干扰素调节因子3(IRF3)的活化。 结论：卵巢颗粒细胞与卵细胞表达TLR3、MDA5、RIG-I受体,并可介导天然抗病毒反应,卵巢的抗病毒反应干扰其自身的激素分泌功能。在早期胚胎发育过程,天然抗病毒机制主要存在于卵黄囊中。结果表明,卵巢颗粒细胞、卵细胞及胚胎卵黄囊中具有天然抗病毒活性。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语表
前言
实验材料
    1.实验动物
    2.细胞培养相关试剂
    3.分子生物学相关试剂
    4.免疫组化和免疫突光实验相关试剂
    5.其它试剂
    6.Real time PGR 引物
    7.分子量标准
    8.主要仪器设备及材料
    9.圭要软件
    10.主要溶液配方
实验方法
    1.基因敲除小鼠的繁殖及鉴定
    2.小鼠的繁殖、超排处理与交配
    3.组织形态学观察
    4.细胞的分离和培养
    5.细胞免疫焚光染色
    6.免疫突光染色检测NF-kB的转位
    7.实时定量 PCR (Quantitaitve real time PGR)
    8.Western Blotting 实验
    9.应用ELISA法定量检测细胞因子
    10.统计学分析
实验结果
    第一部分：Poly(I:C)诱导的卵巢抗病毒反应
    第二部分：病毒模式识别受体在卵细胞中的表达与功能
    第三部分：胚胎卵黄囊的抗病毒免疫反应
讨论
全文小结
参考文献
文献综述
    参考文献
发表文章
致谢

【参考文献】

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1 ;A winning war against hepatitis B virus infection in China[J];Chinese Medical Journal;2007年24期

本文编号：2827880