乙肝病毒大分子表面抗原PreS1区相关片段的表达、免疫性质及应用

发布时间：2020-10-26 15:05

　　 乙肝病毒大分子表面抗原的前 S1(PreS1)区在病毒颗粒的装配和感染中起 重要作用,它存在大量的 T 和 B 细胞免疫表位,并在 PreS1(21-47)片段内具有病 毒与肝细胞膜的结合位点。HBV 疫苗中引入 PreS1 序列,有可能提高目前使用 的由小分子表面抗原构成的疫苗的反应性,深入分析 PreS1 区的表位对新型乙肝 疫苗的设计十分重要。另外,血清抗 PreS1 抗体很可能是乙肝临床诊断的一种新 的指标。因此,研制高灵敏度和稳定性的抗 PreS1 抗体检测系统可能会有很好的 社会和经济效益。 本文首先在大肠杆菌中高效表达了 8 个在 PreS1(21-119)区域内序列交叉重 叠,即 PreS1 (21-47)、PreS1 (34-59)、PreS1 (48-70)、PreS1 (60-85)、PreS1 (71-94)、 PreS1 (86-109)、PreS1 (95-119)和 PreS1 (21-119) 的 GST 融合蛋白。利用这些融 合蛋白,通过免疫印迹和 ELISA 等方法,研究了小鼠和人对 PreS1 区域的免疫 反应特性,鉴定了它的 B 细胞免疫表位,并比较了不同感染类型乙肝患者血清 中针对不同 PreS1 片段的抗体活性。结果显示,人对 PreS1 区域的免疫反应比小 鼠复杂。小鼠的 B 细胞免疫表位存在于 PreS1(21-59)和 PreS1(95-109)片段内,而 人类则位于 PreS1(21-119)区域的绝大部分,其中保护性的表位可能位于 PreS1(21-59)和 PreS1(95-119)序列内,这与以往的研究结果是相符的。值得指出 的是,本文首次鉴别了一个主要的 B 细胞免疫表位,它具有很强的免疫原性, 并推测它可能是构像性的并能诱发机体产生保护性的抗体。这些结果为深入了解 HBV 的免疫学特性和新型乙肝疫苗的设计提供了有益的信息。 为了提高抗 PreS1 抗体的检测水平,本文在大肠杆菌中成功地表达了由柔 性肽(Gly4Ser)3连接两个拷贝 PreS1(21-47)的 GST 融合蛋白(GST-SLS),比较了 它与人工合成 PreS1(21-47)多肽、单拷贝 PreS1(21-47)以及两个拷贝直接相连的 PreS1(21-47)片段与 GST 的融合蛋白(GST-SI 、GST-SII)与抗 PreS1(21-47)抗 体的免疫反应性。结果表明,GST-SLS 的免疫反应性及稳定性均明显高于其他的 PreS1(21-47)融合蛋白或合成多肽,推测可能是柔性肽段增加了两个 PreS1(21-47) 序列之间的距离和自由度,使得两个表位充分地暴露。初步的临床结果也显示, GST-SLS 的灵敏性和稳定性都比 GST-SII 有明显的提高。因此,它具有良好的应 2 WP=3 用开发前景。 最后,本文还用 PreS1(21-119)与 His×6 tag 的融合蛋白免疫 Balb/c 小鼠,采 用细胞融合的方法,获得了两株分泌抗 PreS1 单抗的杂交瘤细胞株,测定了单抗 的亚型为 IgG1。并利用上述 8 个序列重叠的 PreS1 融合蛋白,通过免疫印迹的 方法鉴定了它们的作用表位位于 PreS1(34-47)内。这为单抗的性质和应用的深入 研究打下了基础。
【学位单位】：中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）
【学位级别】：博士
【学位年份】：2004
【中图分类】：R392
【文章目录】：
引言
第一章 序列交叉重叠的 PreS1 片段融合蛋白的表达和纯化
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第二章 小鼠的 PreS1 区 B 细胞免疫表位鉴定
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第三章 人类的 PreS1 区 B 细胞免疫表位鉴定及其保护性分析
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第四章 柔性肽连接的双拷贝 PreS1（21-47）的融合蛋白表达及应用
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
第五章 抗 PreS1 单抗的制备及其免疫学特性研究
    1 材料与方法
    2 结果
    3 讨论
结论
参考文献
附录 在学期间发表的论文
致谢

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 杨剑莹,金菁,孔玉英,卫军,张祖传,李光地,汪垣,袁汉英,李育阳;毕赤酵母表达的重组乙肝表面抗原SS1的纯化及性质鉴定[J];生物化学与生物物理学报;2000年05期

2 杨海林，金怡，曹慧婷，徐谐，李光地，汪垣，张祖传;带preS1的乙肝表面抗原融合蛋白的亲和纯化[J];生物化学与生物物理学报;1996年04期

本文编号：2857155