酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞炎症反应中的作用及机制

发布时间：2020-10-27 19:39

　　 第一部分酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞的表达及功能 目的：酸敏感离子通道（acid-sensing ion channels，ASICs）是一种配体门控型离子通道，属于退化蛋白/上皮钠通道超家族（DEG/ENaC）成员。自1980年在神经元细胞膜上首次被发现报道后，受到越来越多的关注。神经系统中，ASICs广泛分布于前脑、中脑、脑干、脑桥、小脑、上丘脑、脊髓等部位，随着研究的深入，人们发现在神经元外也有大量的ASICs表达，包括神经胶质细胞和免疫细胞。不同的ASIC亚单位在多种生理病理过程中发挥着重要作用，包括缺血性脑损伤、疼痛、学习记忆、癫痫、多发性硬化、偏头痛、肠应激综合症等。已有研究表明，ASICs与免疫炎症具有密切的关系，但小胶质细胞上是否有ASICs的表达目前尚无报道。本实验旨在从基因水平和蛋白水平检测ASICs的表达，并研究该通道在小胶质细胞上的特性。 方法：采用RT-PCR的方法在mRNA水平检测小胶质细胞ASICs的表达；实时定量PCR定量分析ASIC1、2a、3三种亚型在小胶质细胞表达的比例；western blotting方法在蛋白水平检测小胶质细胞ASICs的表达；细胞免疫荧光标记的方法确定ASICs三种亚型在小胶质细胞上的分布；全细胞膜片钳检测小胶质细胞ASICs电流特性；钙离子成像的方法检测小胶质细胞上ASICs通道的离子通透性。 结果：（1）从基因和蛋白水平分别证实ASIC1、2a、3三种亚型在小胶质细胞上均有表达，实时定量PCR结果表明，ASIC1表达量最多，ASIC3次之，ASIC2a最少。其中，ASIC1和ASIC3在胞浆和胞核中均有分布，而ASIC2a主要分布在胞核。（2）LPS刺激的小胶质细胞胞外pH值快速降低可诱发ASIC样电流，该电流具有pH依赖性，pH0.5为6.00±0.04；此外，该电流可被100μM阿米洛利抑制，抑制率为63.15%±6.9%；（3）胞外酸化可引起LPS刺激的小胶质细胞胞内钙升高，该作用可被100μM阿米洛利和10nM PcTx1抑制，抑制率分别达到了61.7%±4.8%和47.3%±6.2%。 结论：小胶质细胞上存在ASICs的表达，其中ASIC1拥有最为丰富的转录基因。LPS 刺激小胶质细胞，易化胞外快速酸化诱发的内向电流和胞内钙升高。 第二部分酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞炎症反应中的作用及机制 目的：炎症发生时常常伴有组织的酸化，即病变处pH值低于正常，这种低pH环境被认为是炎症反应的标志，感受这种变化就能在炎症反应中发挥作用。而机体中确有一种酸敏感离子通道，能够感受细胞外pH的下降，即被细胞外H+激活，通过对Na+和Ca2+的通透形成内向电流，导致细胞膜去极化，产生兴奋性效应。目前已经证实ASICs确实在炎性反应中发挥重要作用。至于ASICs在小胶质细胞神经炎症的免疫调节中的作用还不明确。本实验旨在研究ASICs在LPS刺激下对小胶质细胞炎症因子的表达和划痕迁移中的作用。 方法：采用western blotting方法观察LPS诱导的小胶质细胞iNOS和COX-2的表达，利用ASICs通道非特异性阻断剂amiloride和ASIC1a特异性阻断剂PcTx1研究ASICs在其中发挥的作用；细胞免疫荧光标记的方法观察划痕诱导的小胶质细胞的迁移，利用ASICs通道非特异性阻断剂amiloride和ASIC1a特异性阻断剂PcTx1研究ASICs在其中发挥的作用。 结果：（1）LPS诱导小胶质细胞ASIC1和ASIC2a蛋白表达增加，且ASIC1膜蛋白表达增加。（2）LPS诱导iNOS和COX-2的表达，该作用可被ASICs通道阻断剂阿米洛利及PcTx1抑制。（3）ASICs通道阻断剂阿米洛利及PcTx1通过抑制ERK磷酸化来抑制划痕诱导的小胶质细胞迁移。 结论：ASICs参与了LPS诱导的小胶质细胞炎症因子的表达和划痕诱导的小胶质细胞的迁移。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R363
【文章目录】：
缩略词表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞的表达及功能及
    一 材料和方法
    二 结果
    三 讨论
    小结
第二部分 酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞炎症反应中的作用及机制
    一 材料和方法
    二 结果
    三 讨 论
    小结
全文总结
本文的创新点
展望
参考文献
综述
    参考文献
攻读博士学位期间已发表和待发表的论文
致谢

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 廖君;夏兴;石咏梅;易亚乔;王国佐;周瑜;苏浩;葛金文;;脑缺血大鼠海马CA2区转铁蛋白受体及膜铁转运蛋白的表达及脑泰方提取物干预研究[J];中华中医药杂志;2014年05期

2 黄银兰;万明雨;梁希森;梁繁荣;;经穴效应通过调控ATPAF2基因表达的机制研究[J];辽宁中医杂志;2014年07期

3 Heng Yang;Jiongxing Wu;Ren Guo;Yufen Peng;Wen Zheng;Ding Liu;Zhi Song;;Glycolysis in energy metabolism during seizures[J];Neural Regeneration Research;2013年14期

4 李莹;杜旭飞;杜久林;;小胶质细胞的生理特性和功能[J];生理学报;2013年05期

5 吴晓丽;任香梅;;镉诱导肾细胞凋亡及其对PI3K/Akt和ERK1/2信号通路的影响[J];热带医学杂志;2013年12期

6 郭英俊;毛海婷;聂林;张稳;曲迅;;ASICs的胞内分布及其功能调节机制的研究进展[J];现代生物医学进展;2014年16期

7 周清萍;;镉致肾脏毒性机制及防治研究进展[J];宜春学院学报;2013年12期

8 张雪蓉;张巧莲;朱钧;秦建华;;围术期静注乌司他丁降低老年髋关节置换患者术后早期认知功能效果观察[J];新疆医科大学学报;2014年02期

9 吴文宁;王玉婵;董六一;陈志武;;青藤碱对大鼠海马神经元缺血损伤的保护作用[J];中国药理学通报;2014年04期

10 师春梅;赵斌;谭燕;赵奉波;李之望;;P物质对大鼠DRG神经元H~+门控电流的调制作用[J];中国病理生理杂志;2014年05期

相关博士学位论文 前10条

1 江波;磷酸肌醇耦联的多巴胺受体激动剂SKF83959抗抑郁症作用及机制[D];华中科技大学;2012年

2 余晓巍;酸敏感离子通道在培养大鼠小胶质细胞炎症反应中的作用及机制[D];华中科技大学;2013年

3 段雅乐;姜黄素对老年鼠认知功能的影响及其分子基础研究[D];华东师范大学;2013年

4 孙瑾;白藜芦醇甙对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠ERK通路的影响及其改善学习记忆能力的机制研究[D];大连医科大学;2012年

5 潘志杰;负向免疫调控分子TREM-2在肺癌发病中作用及机制的研究[D];浙江大学;2012年

6 王意;TLR4信号通路在老龄大鼠术后认知功能下降中的作用研究[D];中南大学;2013年

7 阳衡;糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖抗痫作用机制研究[D];中南大学;2013年

8 刘卫青;不同给药方式下MK-801诱导的精神分裂症核心症状大鼠模型研究[D];中南大学;2012年

9 李婷;小鼠急性缺血性脑中风后小胶质细胞增生来源的研究[D];兰州大学;2013年

10 蒋璐;PKGⅡ对胃癌细胞由EGF/EGFR启动的信号转导和相关的生物学活动的影响[D];江苏大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 李雪;小胶质细胞活化在孕期感染所致精神分裂症大鼠模型中的研究[D];郑州大学;2013年

2 陈智;高脂饮食诱导肥胖大鼠AC3基因的表达及运动干预影响[D];广西医科大学;2013年

3 汪海波;慢性复合应激对家兔多个系统功能的影响及Orcu-DRB等位基因的测定[D];大连医科大学;2012年

4 黄刚;Presenilins-1/2双基因敲除对小鼠嗅觉功能的影响及其机制的研究[D];华东师范大学;2013年

5 余舒莹;1、半胱氨酰白三烯受体1参与白三烯D_4诱导的BV2小胶质细胞激活 2、半胱氨酰白三烯受体1参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的调节[D];浙江大学;2013年

6 杨乐;人参皂甙-Rd对SNI大鼠痛觉异常及延髓孤束核内P物质和NK-1受体表达的影响[D];第四军医大学;2013年

7 康丽;单纯性脑震荡大鼠海马OX-42和EP2的表达及AH6809干预研究[D];昆明医科大学;2013年

8 曹晴晴;ASIC3在耐药性癫痫患者及大鼠模型脑组织中的表达及功能研究[D];重庆医科大学;2013年

9 陈慧彬;慢性不可预见性应激大鼠海马喹啉酸对谷氨酸及其受体的调节[D];陕西师范大学;2013年

10 姜晓芳;鸡黑素皮质素受体4基因的分子克隆及其突变体的药理学特性初步研究[D];扬州大学;2013年

本文编号：2858959