CTLA4-Ig的表达、修饰和肿瘤免疫治疗策略性研究

发布时间：2020-11-04 04:09

　　 CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2、CH3区组成的融合蛋白,可以与B7结合,通过阻断B7与CD28的结合,从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号,可作为免疫抑制剂用于器官移植。在本研究中,我们将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr,并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr细胞中,转染的CHO-dhfr-细胞用氨甲喋呤(MTX)进行筛选。重组蛋白的表达用RT-PCR,ELISA,细胞免疫荧光染色和Western-blot进行鉴定。最后采用protein A纯化重组蛋白质。 CTLA4是T细胞表面T细胞活化的负调控因子,和CD28同样为B7分子的配体。虽然T细胞表面的CTLA-4表达非常少,其表达丰度仅为CD28的2%-3%,但CTLA-4与B7分子的结合力要比CD28与B7的结合力高20-50倍。。因此,CTLA-4具有优先结合B7分子的特性,其作用在于传递阴性第二信号,调节T细胞活化。CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2、CH3区组成的融合蛋白,与细胞表面的B7分子结合后,可以起到封闭作用。利用多种方法研究表明,CTLA4Ig是一种新型的人源性粘附分子类免疫抑制剂,治疗以T细胞为主介导的移植排斥反应是其最具潜力的应用领域。另外,抗CTLA4抗体还能够有效地用于抗肿瘤治疗。本研究将CTLA4Ig融合分子克隆到含二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的真核表达载体pCI-dhfr中,并转染到CHO-dhfr细胞中获得了稳定表达,为进一步筛选高表达的工程细胞株奠定了基础。
【学位单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R392
【部分图文】：

用HRP一抗人Fc抗体3o7C作用45分钟后，ECL显也可用鼠抗人CTLA4先进行反应，再加入HRP一羊抗鼠gIGECL显色体系进行显色。果AL4gI融合基因的克隆和鉴定真核表达载体PIGI一CTLA4Ig用EocVR和Notl双酶切后，得LA4Ig的基因片段，包括Fe段1500bp基因和CTLA450obp的一hdrf空载体连接后，用菌落PCR法，从挑出的6个克隆中，4号三个阳性克隆。再将阳性克隆小量提取质粒，以Eoc咫十结果都有CTLA4gI基因片段的插入。将其中的第3号克隆4Ig。用Qgien公司的大提质粒试剂盒提取质粒，准备用于转

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【参考文献】

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本文编号：2869593