algR基因在铜绿假单胞菌生物被膜播种型扩散中的作用及机制研究

发布时间：2020-11-05 15:26

　　 目的：探讨algR基因在铜绿假单胞菌生物被膜播种型扩散中的作用及机制。 方法：采用同源重组的方法敲除PAO1和PA17染色体中的algR基因,得到PAO1和PA17的algR基因敲除的同源重组菌PSL317和PA17’；分别在PSL317和PA17’中通过电转染转入质粒pVDtacPIL(含有鞭毛和Ⅳ型菌毛基因)、pVDZ'2R(含有algR基因)和pEX1.8-rhlAB(含有rh1AB基因及rhlA启动子)。使用改良平板培养法建立PA17、PAO1、PSL317、PA17、PAOmucA56及各同源重组菌株的生物膜体外模型,观察各个菌株间生物被膜生长和播种型扩散的异同；RT-PCR检测各菌株algR基因在生物被膜生长过程中不同时间点(1,3,5,7,9,12天)的表达量；RT-PCR检测PAO1和PAOmucA56在生物被膜生长过程中不同时间点(1,3,5,7,9,12天)QS系统rhlA/B基因的表达量；在琼脂平板上观察PA17、PAO1、PSL317、PA17'及各同源重组菌株的游泳、群游、颤搐运动能力的差别。 结果：PAO1于第12天发生播种型扩散,PA17于第7天发生播种型扩散；PA17的algR基因在第7天时最高,PAO1则在第11天时最高；PAO1的swimming、swarming以及twitching能力均强于PA17。PSL317相关实验菌株较PA17’相关实验菌株播种型扩散时间晚、运动能力强。PAOmucA56于第7天发生播种型扩散；PAOmucA56的algR基因在第7天时最高,PAO1则在第11天时最高；PAO1的rhlA在第11天表达最高,PAOmucA56的rhlA在第3天表达最高；PAO1的rhlB在第11天表达最高,PAOmucA56的rhlB在第9天表达最高。 结论：证实了algR基因的高表达可促进铜绿假单胞菌的生物膜播种型扩散；algR基因影响生物被膜形成的基因调节通路中,rhlA/B通路可能有较大意义。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R378.991
【文章目录】：
前言
    参考文献
中文摘要
Abstract
第一部分 PAO1和PA17在生物被膜播种型扩散和运动性上的差异
    摘要
    引言
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
第二部分 PSL317和PA17’在生物被膜播种型扩散和运动性上的差异
    摘要
    引言
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
第三部分 PAO1和PAOmucA56在生物被膜播种型扩散和运动性上的差异
    摘要
    引言
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
全文总结
综述
    参考文献
缩略词表
附录
致谢

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本文编号：2871828