乙脑病毒全长cDNA的扩增、克隆及体外转录制备感染性转录体的研究

发布时间：2020-12-11 09:33

　　乙脑病毒，属黄病毒科黄病毒属成员。基因结构为单股正链RNA，全长11kb。本病毒主要侵犯中枢神经系统，且患者以儿童居多，在黄病毒中乙脑病毒引起的乙型脑炎病死率最高，年病死人数超过1万人。随着对该病毒病原学研究的深入，从基因水平探讨病毒的生物学特性，是研究其致病机理与构建新型疫苗的必由之路。 但是乙脑病毒为RNA病毒，和其它非逆转录RNA病毒一样，在复制过程中不形成DNA中间体。要利用分子生物学技术通过对病毒RNA直接进行重组、突变等方法在基因水平研究病毒的分子生物学特性存在着一定的困难，因为突变、重组、克隆等分子生物学技术都是在DNA水平上的操作。体外转录制备感染性RNA(感染性转录体)技术为RNA病毒的分子生物学研究开辟了新路。该技术是将病毒的RNA逆转录成cDNA，把全长的cDNA置于RNA聚合酶启动子的下游，在RNA聚合酶的作用下在体外转录出全长的正链RNA，经转染易感细胞后即可复制出子代病毒颗粒。由于这种子代病毒是来自cDNA，这样人们就可以在DNA水平上进行操作。重组或突变将被转录到子代病毒的RNA中，从而实现人为改造病毒达到研究其复制、表达 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

长模板RT一PeR扩增JEv全长coNA

图7.Cl克隆体外转录产物转染BHK细胞。a:BHK细胞转染后第6天病只转染Cl克隆DNA的对照细胞;Fig.7.BHKeelltransfeetedwithRNAtranseriptsderivedrfomCI6daysafterBHKeelltransfeetedwithtranseriPts:b:ControltransfeetewitDNofleone

10.长模板RT一CPR产物体外转录后转染BHK细胞第6天的病变结果(10)a，染PCR产物的对照细胞。.10.6daysafterBHKeelltransfeetedwiththetranseriPtsderivedflieonoflongtemplateRT一PCR(10a).10b:ControlBHKeelltransfeetedwfull一lengtheDNA

【参考文献】：
期刊论文
[1]逆转录-半套式-聚合酶链反应在乙脑早期诊断中的应用[J]. 黄庆生,马文煜,姜绍谆,张富泉,李别虎,肖毅,刘利兵.  细胞与分子免疫学杂志. 1998(04)
[2]RNA病毒感染性转录体的制备[J]. 兰水云.  国外医学(微生物学分册). 1998(02)



本文编号：2910301