miRNA-124在肺泡上皮细胞和巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控机制研究

发布时间：2021-01-09 01:07

　　微小RNA（microRNA, miRNA）是近年来发现的一类新型内源性非编码小RNA分子,在器官发育、肿瘤发生、细胞分化以及机体免疫中都起着关键的作用。最新研究证实miRNA对调节免疫反应有重要作用。目前有关miRNAs在抗结核分枝杆菌感染免疫调节作用的相关研究报道较少,尤其有关microRNA-124（miR-124）在肺脏细胞中的作用与机制方面的研究目前还未见报道。因此,探讨miR-124和TLR信号通路之间的相互作用对肺泡上皮细胞和巨噬细胞抗结核分枝杆菌的免疫调节作用有着重要的科学理论价值和社会实际意义。本研究重点探讨miR-124在肺泡上皮细胞、巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染中的作用机制。以人肺脏肺泡上皮细胞系A549以及小鼠肺泡巨噬细胞系RAW264.7为靶细胞,用结核分枝杆菌疫苗株BCG感染并转染miR-124模拟物（mimic）、miR-124抑制剂（：inhibitor）及niRNA阴性对照物（miR-124Nc）,通过ELISA、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹等手段分析与结核免疫相关的主要免疫信号分子（TLR信号）和主要炎症因子的变化；并通过niRNA靶序列双荧光素酶... 

【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文縮略词表
第一章 文献综述
    1.1 结核分枝杆菌感染免疫
        1.1.1 肺脏的先天免疫机制
        1.1.2 结核分枝杆菌感染免疫
    1.2 Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）信号通路
        1.2.1 TLRs的发现
        1.2.2 TLRs的组成结构和配体
        1.2.3 TLR信号转导机制
    1.3 miRNA的研究进展
        1.3.1 miRNA的发现和命名
        1.3.2 miRNA的合成及作用机制
        1.3.3 miRNA与免疫相关的信号转导通路
    1.4 miR-124及其细胞信号调节功能
    1.5 本研究的目的及意义
第二章 miR-124靶基因的预测及验证
    引言
    2.1 材料与方法
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验方法
        2.1.3 数据分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 miR-124靶基因的生物信息学预测
        2.2.2 miR-124可能靶基因的荧光素酶分析
    2.3 讨论
第三章 miR-124对结核分枝杆菌感染肺泡上皮细胞的免疫调控作用
    引言
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
        3.1.3 数据分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 A549细胞的生长状态
        3.2.2 A549细胞RNA的提取鉴定
        3.2.3 A549细胞转染效果及转染效率
        3.2.4 BCG诱导miR-124在A549细胞的表达
        3.2.5 miR-124通过靶向MyD88基因的3’UTR下调MyD88的表达
        3.2.6 miR-124下调BCG诱导的A549细胞MyD88的表达
        3.2.7 miR-124抑制BCG诱导的A549细胞TLR6和TRAF6的表达
        3.2.8 MyD88激发miR-124在A549细胞中的表达
        3.2.9 miR-124对A549细胞TLR信号通路下游炎性细胞因子表达的影响
    3.3 讨论
第四章 miR-124对结核分枝杆菌感染巨噬细胞的免疫调控作用
    引言
    4.1 材料和方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验方法
        4.1.3 数据分析
    4.2 结果与分析
        4.2.1 BCG诱导巨噬细胞miR-124的表达
        4.2.2 miR-124抑制巨噬细胞RAW264.7中TLR6蛋白水平的表达
        4.2.3 miR-124下调BCG诱导MyD88在巨噬细胞RAW264.7中的表达
        4.2.4 miR-124抑制BCG诱导巨噬细胞TRAF6表达
        4.2.5 miR-124抑制BCG诱导的NF-κB介导的巨噬细胞炎症反应
        4.2.6 MyD88激发miR-124在巨噬细胞中的表达
    4.3 讨论
第五章 miR-124在体内抗结核分枝杆菌感染中的免疫调节作用与机理
    引言
    5.1 材料和方法
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验方法
        5.1.3 数据分析
    5.2 实验结果
        5.2.1 健康人体和结核病患者体内miR-124的表达差异分析
        5.2.2 BCG感染对小鼠肺脏miR-124表达的影响
        5.2.3 MyD88基因缺陷型小鼠的鉴定
        5.2.4 MyD88基因缺陷型小鼠肺脏中miR-124的表达
    5.3 讨论
第六章 结论和展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
致谢
作者简介
攻读博士学位期间发表的论文



本文编号：2965668