结核分枝杆菌基因疫苗的构建及其免疫学特性的初步研究

发布时间：2021-01-08 19:39

　　结核病（tuberculosis，TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）所致以呼吸道为主的慢性传染病。目前全球有1/3的人口感染MTB，每年有1000万的新发病人和300万的病人死亡，表明TB仍是影响全球人类健康的一个主要公共卫生问题。近年来，耐药结核分枝杆菌的流行、与HIV的合并感染以及人口流动的增加等因素，进一步加剧了TB对人类的威胁。卡介苗（BCG）是目前TB唯一的预防性疫苗，在发展中国家广泛应用，但其保护效果不稳定。另外，BCG接种干扰了利用PPD对MTB感染的诊断，接种免疫缺陷病人可能导致播散性感染等缺陷。鉴于BCG自身的不足，以及当前TB流行的严重性，研究更有效的疫苗具有重要意义。 基因免疫在包括TB的多种传染病的动物模型中可引起体液和细胞免疫应答。利用质粒DNA真核表达载体，已经有24个MTB抗原被表达，这些抗原主要来自MTB培养滤液蛋白（CFP）。其中有几个蛋白在动物模型中显示了较高的保护性，如Ag85复合体、ESAT6、MPT64、Hsp65和PstS3等。因而基因免疫可能是有希望的用于防治TB的一种有效方法。 ... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略语表
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英文摘要
前言
文献回顾
    一、 TB威胁的严重程度和新型疫苗研究的意义
    二、 理想的预防TB疫苗的特征
    三、 TB新型疫苗的研究进展
        1) 现有的TB新型疫苗的概况和优缺点
        2) 亚单位疫苗
        3) 基因工程重组活疫苗
        4) 减毒活疫苗
        5) 基因疫苗
    四、 展望
研究内容
    第一部分 MTB Ag85B基因真核表达载体的构建和免疫原性研究
        一、 实验材料
        二、 实验方法
            1. MTB的培养
            2. MTB基因组DNA的提取
            3. MTB的培养和培养滤液蛋白（CFP）的制备
            4. MTB H37Ra菌株Ag85B基因的扩增、克隆及序列分析
            5. 亚克隆法构建Ag85B基因的真核表达载体
            6. 表达载体的转化和酶切鉴定
            7. 质粒的大量提取和纯化
            8. 转染CHO细胞
            9. RT-PCR检测Ag85B成熟蛋白mRNA的表达
            10. 基因免疫
            11. 基因免疫小鼠血清中Ag85B抗体的检测
        三、 结果
            1. Ag85B基因的PCR扩增结果
            2. Ag85B基因的克隆
            3. MTB H37Ra株Ag85B基因的序列分析
            4. 同源性收索的结果
            5. MTB Ag85B基因的真核表达载体的构建
            6. Ag85B成熟蛋白mRNA在CHO细胞中的表达
            7. Dot blotting检测结果
            8. 血清Ag85B抗体的滴度
        四、 讨论
    第二部分 MTB Ag85B成熟蛋白基因疫苗的细胞免疫反应和保护性的初步研究
        一、 实验材料
        二、 实验方法
            1. MTB H37Rv菌株的培养和定量
            2. 基因免疫
            3. 脾脏细胞悬液的制备和单个核细胞的分离与计数
            4. 抗原特异的脾淋巴细胞增殖实验
            5. IFNγ的诱生
            6. IFNγ含量的检测
            7. MTB H37Rv毒株的攻击实验
            8. 过继免疫保护实验
            9. 脾脏细菌CFU计数及统计学检验
        三、 结果
            1. 脾淋巴细胞增殖实验
            2. IFNγ的含量
            3. 基因免疫的保护性
            4. 过继免疫的保护性
        四、 讨论
小结
致 谢
参考文献



本文编号：2965179