超声场下基因/模式药物输送及生物学效应的实验研究
发布时间：2021-01-09 20:23
近年来,随着超声技术的发展、应用以及微泡造影剂研制的进展,超声与微泡造影剂的协同作用在基因治疗、药物输送、溶栓治栓、炎症和肿瘤的靶向显影与治疗等医学领域显示了巨大的应用潜力,逐渐成为医学领域研究中的一个热点。本研究选用人脐静脉内皮细胞（HUVECs）、HeLa细胞作为离体细胞模型,以EGFP基因作为外源目的基因、核酸荧光染料TO-PROTM-1、PI、DAPI作为模式药物,分别通过MTT比色分析法、倒置荧光显微镜观察法、流式细胞检测技术、MGG染色法、考马斯亮蓝染色法研究了20 kHz低频超声单独和与微泡造影剂联合介导EGFP基因转染内皮细胞、HeLa细胞的效率和规律、超声与脂质体共同介导EGFP基因转染HeLa细胞的效率和规律、超声介导模式药物输送的效率和规律以及超声对血管内皮细胞增殖活性、生长曲线、迁移能力和细胞骨架的影响。研究结果表明:1. 20 kHz低频超声能介导EGFP基因转染人脐静脉内皮细胞和HeLa细胞,但转染率较低,一般在0.2%2%之间;细胞类型对转染率有影响,HeLa细胞的转染率要高于内皮细胞的转染效率;质粒浓度对转染效率有影响,在一定范围内...
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-N1质粒图谱
图 2-2 pEGFP-N1 质粒的多克隆位点2.2.2 细胞培养与鉴定（1） HUVECs 细胞培养与鉴定EA.Hy926 细胞株培养用含 10%新生牛血清、100 U/ml 的青霉素、100 mg/ml链霉素、20 mmol/1 HEPES、 2% NaHCO3、 2% HAT、 pH=7.2-7.4 的 RPMI1640全培养基在 37 ℃ , 5% CO2，饱和湿度条件的孵箱里培养。EA.Hy926 细胞株生长较快，2~3 天换液一次，3~4 天可传代。EA.Hy926 细胞株的鉴定分为形态学和 vWF因子相关抗原免疫组化鉴定，已由细胞株提供者鉴定。（2） HeLa 细胞培养HeLa 细胞株培养用含 10%新生牛血清、100U/ml 的青霉素、100 mg/ml 链霉
-3 超声波细胞破碎仪 美国 BRANSON S-250图 2-4 超声照射示意图如图 2-3 和图图 2-4 所示。超声照射频率为脉冲频率为 1Hz，9%输出振幅（输出功率 头面积约 0.8 cm2, 输送功率 3.77 W/ cm变。转染步骤
【参考文献】：
期刊论文
[1]超声治疗的物理学机理与临床应用[J]. 李义兵,余大昆. 咸宁学院学报(医学版). 2005(06)
[2]高强度聚焦超声治疗肿瘤的研究进展[J]. 朱栋晓. 实用临床医药杂志. 2005(05)
[3]SonoVueTM——一种新型超声对比剂的研究进展[J]. 刘丽萍,王智彪. 国外医学.生物医学工程分册. 2005(01)
[4]医学超声治疗技术研究及其应用[J]. 林书玉,杨月花. 陕西师范大学学报(自然科学版). 2004(02)
[5]白蛋白微泡促进报告基因在细胞表达的实验研究[J]. 区文超,修建成,赖文岩,曾平,周忠江,刘俭,刘伊丽. 中国病理生理杂志. 2004(04)
[6]一种改良的肌细胞骨架染色方法[J]. 程云会,韩梅,温进坤,张永钢,刘智敏. 细胞生物学杂志. 2004(02)
[7]超声造影剂靶向性作用机制的研究进展[J]. 景香香. 临床超声医学杂志. 2003(06)
[8]超声波空化效应对体外培养细胞细胞膜作用的实验研究[J]. 冉海涛,任红,王志刚,唐海林,凌智瑜,罗子国. 中华超声影像学杂志. 2003(08)
[9]超声医学技术简介[J]. 伍于添. 中国超声医学杂志. 2003(06)
[10]超声介导白蛋白微泡破裂法促进增强型绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞的表达[J]. 管晓翔,范乐明,陈琪,郦明芳,李肖蓉,邵力正. 中国动脉硬化杂志. 2003(01)
博士论文
[1]超声介导脂质体微泡对大鼠血管平滑肌细胞生物学行为影响的研究[D]. 张萍.第三军医大学 2005
硕士论文
[1]超声辐照对培养的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响[D]. 张俊霞.重庆医科大学 2003
本文编号：2967336
【文章来源】：电子科技大学四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-N1质粒图谱
图 2-2 pEGFP-N1 质粒的多克隆位点2.2.2 细胞培养与鉴定（1） HUVECs 细胞培养与鉴定EA.Hy926 细胞株培养用含 10%新生牛血清、100 U/ml 的青霉素、100 mg/ml链霉素、20 mmol/1 HEPES、 2% NaHCO3、 2% HAT、 pH=7.2-7.4 的 RPMI1640全培养基在 37 ℃ , 5% CO2，饱和湿度条件的孵箱里培养。EA.Hy926 细胞株生长较快，2~3 天换液一次，3~4 天可传代。EA.Hy926 细胞株的鉴定分为形态学和 vWF因子相关抗原免疫组化鉴定，已由细胞株提供者鉴定。（2） HeLa 细胞培养HeLa 细胞株培养用含 10%新生牛血清、100U/ml 的青霉素、100 mg/ml 链霉
-3 超声波细胞破碎仪 美国 BRANSON S-250图 2-4 超声照射示意图如图 2-3 和图图 2-4 所示。超声照射频率为脉冲频率为 1Hz，9%输出振幅（输出功率 头面积约 0.8 cm2, 输送功率 3.77 W/ cm变。转染步骤
【参考文献】：
期刊论文
[1]超声治疗的物理学机理与临床应用[J]. 李义兵,余大昆. 咸宁学院学报(医学版). 2005(06)
[2]高强度聚焦超声治疗肿瘤的研究进展[J]. 朱栋晓. 实用临床医药杂志. 2005(05)
[3]SonoVueTM——一种新型超声对比剂的研究进展[J]. 刘丽萍,王智彪. 国外医学.生物医学工程分册. 2005(01)
[4]医学超声治疗技术研究及其应用[J]. 林书玉,杨月花. 陕西师范大学学报(自然科学版). 2004(02)
[5]白蛋白微泡促进报告基因在细胞表达的实验研究[J]. 区文超,修建成,赖文岩,曾平,周忠江,刘俭,刘伊丽. 中国病理生理杂志. 2004(04)
[6]一种改良的肌细胞骨架染色方法[J]. 程云会,韩梅,温进坤,张永钢,刘智敏. 细胞生物学杂志. 2004(02)
[7]超声造影剂靶向性作用机制的研究进展[J]. 景香香. 临床超声医学杂志. 2003(06)
[8]超声波空化效应对体外培养细胞细胞膜作用的实验研究[J]. 冉海涛,任红,王志刚,唐海林,凌智瑜,罗子国. 中华超声影像学杂志. 2003(08)
[9]超声医学技术简介[J]. 伍于添. 中国超声医学杂志. 2003(06)
[10]超声介导白蛋白微泡破裂法促进增强型绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞的表达[J]. 管晓翔,范乐明,陈琪,郦明芳,李肖蓉,邵力正. 中国动脉硬化杂志. 2003(01)
博士论文
[1]超声介导脂质体微泡对大鼠血管平滑肌细胞生物学行为影响的研究[D]. 张萍.第三军医大学 2005
硕士论文
[1]超声辐照对培养的血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响[D]. 张俊霞.重庆医科大学 2003
本文编号：2967336
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