抗肝癌重组单链Fv段—免疫毒素（scFv25-TNFα）及二硫键稳定Fv段—免疫毒素（dsFv25-TNFα）的构建、表

发布时间：2021-01-17 21:04

　　1．抗肝癌重组单链Fv段-免疫毒素（m／hseFv25-TNFα）的表达、纯化及导向研究 将抗肝癌重组单链Fv段-免疫毒素（pGEX 4T-1 m／hscFv25-TNFα）在大肠杆菌JM109中以IPTG诱导进行表达。表达产物为包涵体形式，溶解和折叠后，以GST亲合层析色谱纯化。间接免疫荧光染色表明m／hscFv25-TNFα的特异性和亲和力与亲本抗体HAb25相比没有明显下降。MTT实验提示在放线菌素D存在的情况下，体外m／hscFv25-TNFα对靶细胞SMMC-7721有明显的细胞毒作用；如无放线菌素D，靶细胞SMMC-7721则对m／hscFv25-TNFα不敏感。荷肝癌裸鼠体内的抑瘤实验显示m／hscFv25-TNFα对荷肝癌裸鼠体内直径2～4mm左右的肿瘤具有一定的导向杀伤作用，实验组14只裸鼠中3只部分缓解，4只完全消失，5只处于静止状态。而TNFα对照组无完全缓解。我们的结果提示TNFα对靶细胞SMMC-7721的杀伤作用不是直接的，必须依赖于体内的某些机制，可能TNFα是通过作用于血管肉皮细胞，或通过诱导肿瘤细胞凋亡，或体内某些物质起到了放线菌素D、谷胱甘肽或... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

mscFv25一TNFa的诱导表达产物及纯化产物的SDS一PAGE从左到右:纯化产物，诱导宿主菌，未诱导宿主菌，marker

图3mseFv25一TNFa的免疫荧光染色4.m/hscFv25一TNFa的MTT实脸M下丁实验结果显示，靶细胞S(MMC一7721)对mscFv25一-NTF以和TNF如勺细胞毒作用不敏感。但在终浓度为5雌/ml的放线菌素D存在的情况下，对肝癌细胞7721有明显的细胞毒作用。5·m/hseFv一TNFa的导向治疗在剂量为253协留kg时，hahscFv25一NTF。组中有4只裸鼠的移植瘤完全消失，3只部分缓解，5只处于静止状态。NTFa组均为增大，无全消失。对照组肿瘤呈持续生长，14天后达1.0cm3，表明耐hsFcv25-TNFa具有一定的导向治疗作用。各实验组肝、肺组织活检未见转移。。

markernon一redueedredueedsFv一TNFa，分别经非还原上样缓冲淑no和还原上样缓冲和rdeucdebueff)r性及稳定性实验的目的是先让有导向活性的SeFv-TNMc一7721结合，未吸附的(无导向活性合刊F咖勺细胞毒活性，从而间接检测7.1.2则在终浓度为5雌/ml的放线菌素a和dsFy.INF。对靶细胞SMMC一7721得结果相似，采用统计学线性拟合方明在终浓度为5、岁ml放线菌素D


本文编号：2983588