胰高血糖素样肽-1融合蛋白生物学活性检测方法的建立及验证

发布时间：2021-01-19 10:25

　　目的建立胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）融合蛋白（GLP1-Fc）生物学活性荧光素酶报告基因测定方法,并进行验证。方法采用电穿孔法将GLP-1受体（GLP-1R）表达载体和cAMP反应元件（cAMP response element,CRE）报告基因共转染入HEK-293细胞中,通过加入潮霉素B筛选和单克隆培养,获得稳定转染的单克隆细胞株;采用药物敏感的细胞株建立报告基因生物学活性测定方法,并对方法进行优化及验证。结果筛选出GLP-1-Fc活性检测细胞株293-GLP-1R/CRE,该细胞较合适的活性检测参数为每孔接种20 000个细胞,培养10～15 h,利拉鲁肽的起始浓度为10 mg/L,作用时间5 h。采用建立的方法检测不同效价利拉鲁肽样品相对生物学活性的回收率在（90. 43±3. 29）%～（99. 87±5. 34）%之间,利拉鲁肽（标准品）与样品6次测定的EC50的CV值分别为2%和3%,二者无差异。结论建立了快速、精确的测定GLP1-Fc生物学活性的方法,为GLP-1相关的药效指标评价提供了更加客观、全面的手段。 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(08)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞、质粒及菌株
    1.2 主要试剂
    1.3 菌株转化及质粒提取
    1.4 稳定细胞株的构建
    1.5 细胞筛选
    1.6 荧光素酶活性检测
    1.7 活性检测方法的优化
    1.8 数据处理
    1.9 方法的验证
        1.9.1 准确性
        1.9.2 线性
        1.9.3 精密性
2 结果
    2.1 GLP-1-FC活性细胞株的筛选
    2.2 活性检测方法的建立
    2.3 活性检测方法的优化
        2.3.1 细胞培养时间
        2.3.2 细胞接种密度
        2.3.3 药物作用时间
        2.3.4 细胞代次
    2.4 方法的验证
        2.4.1 准确性
        2.4.2 线性
        2.4.3 精密性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于胰高血糖素类肽-1受体的2型糖尿病治疗药物研究进展[J]. 张慧敏,林琳,陈媛媛,林忠,杜有功,蒋正立.  中国临床药理学与治疗学. 2015(06)
[2]胰高血糖素样肽-1受体激动剂在神经系统疾病治疗中的研究进展[J]. 印蕾,王影,陈松,高向东.  中国药科大学学报. 2014(04)
[3]稳定表达CRFR1的HEK293细胞株建立与功能鉴定[J]. 葛治娟,于金梅,马晓芸,刘晓燕,郑建全.  中国药理学通报. 2014(08)



本文编号：2986817