人乳铁蛋白基因克

发布时间：2025-03-15 07:09

　　乳铁蛋白也称乳转铁蛋白，是乳汁中主要的铁结合蛋白，广泛分布于多种组织、细胞内，具有非特异性免疫、参与铁代谢和细胞生长调节等功能。与其它动物乳铁蛋白相比，人乳铁蛋白更适于人类食用，为了满足需求，应选择合适的系统，进行人乳铁蛋白基因的异源表达。目前常用的表达系统中，动物乳腺是人乳铁蛋白基因表达较为合适的器官。因此，我们克隆了人乳铁蛋白cDNA，构建了乳腺特异表达载体，在小鼠乳腺癌细胞和个体内进行了表达，并利用精子载体法尝试了转基因兔、转基因羊的制备。 首先利用RT-PCR方法从人乳腺组织中扩增出乳铁蛋白cDNA序列；PCR扩增了800bp的山羊β-乳球蛋白基因5′端调控序列。通过同源序列-PCR扩增方法连接得到的片段，酶切后克隆到表达载体中，获得人乳铁蛋白基因乳腺特异表达载体pLNCXHLF。 脂质体包裹pLNCXHLF，转染小鼠乳腺癌细胞MA-782，通过G418、PCR筛选获得阳性单克隆细胞。阳性细胞用海藻酸钠包埋培养，加入激素诱导，检测结果表明：培养液上清含有人乳铁蛋白，分子量为34KD，最高含量为65mg／L／10～5细胞；重组人乳铁蛋...

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【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
英文摘要
第一章 前言
    一 研究背景
    二 选题依据及目的意义
    三 实验技术路线
第二章 文献综述
    一 乳铁蛋白研究现状
        (一) 分布及含量
        (二) 结构及特性
        (三) 乳铁蛋白的代谢
        (四) 生物学功能
        (五) 乳铁蛋白基因
        (六) 重组人乳铁蛋白
        (七) 应用展望
    二 乳腺生物反应器研究进展
        (一) 乳腺生物反应器优势及存在的问题
        (二) 乳腺生物反应器的表达构件
        (三) 乳腺生物反应器研究状况
    三 转基因动物研究
        (一) 转基因动物开发价值比较
        (二) 转基因动物制备方法
        (三) 外源基因载体
    四 转基因动物研究中存在的问题
    参考文献
第三章 人乳铁蛋白基因克隆及载体构建
    一 材料与试剂
    二 实验方法
        1 山羊β-乳球蛋白基因5′端调控序列的克隆
        2 人乳铁蛋白cDNA克隆
        3 载体构建
    三 结果与分析
    四 讨论
    五 小结
    参考文献
第四章 人乳铁蛋白cDNA的细胞表达
    一 材料及试剂
    二 实验方法
        1 G418细胞毒性的检测
        2 激素诱导条件的选择
        3 细胞转染及筛选
        4 转染细胞的PCR检测
        5 转染细胞的固定化培养
        6 转染细胞诱导表达及样品处理
        7 诱导产物检测
        8 重组人乳铁蛋白分析
    三 结果与分析
    四 讨论
    五 小结
    参考文献
第五章 转人乳铁蛋白基因小鼠制备及外源基因表达
    一 材料及主要试剂
    二 实验方法
        1 质粒注入
        2 子鼠PCR检测
        3 子鼠Southern检测
        4 乳汁Dot-ELISA检测
        5 乳汁Western blotting检测
        6 ELISA法测定乳汁中重组蛋白含量
    三 结果与分析
    四 讨论
    五 小结
    参考文献
第六章 转基因兔及羊的制备
    一 材料及主要试剂
    二 实验方法
        1 睾丸组织注射法
        2 输精管内成熟精子转染法
    三 结果与分析
    四 讨论
    五 小结
    参考文献
第七章 结论与展望
    一 主要结论
    二 本论文的创新之处
    三 有待于进一步开展的工作
    四 展望
缩略语
附录
完成的论文
个人简历
致谢



本文编号：4035360