改进后的验证SREBP-1c下游调控基因的染色质免疫共沉淀方法

发布时间：2025-03-20 06:36

　　 目的以SREBP-1c下游调控基因为例,对HEK 293T细胞进行染色质免疫共沉淀(chromatin co-immunoprecipitation, CHIP)实验改进,获得更好实验结果。方法对常规CHIP改进方法包括细胞洗涤时添加蛋白酶抑制剂PMSF、免疫沉淀复合物采用3步洗涤法、解交联采用蛋白酶K 56℃水浴10 min、样品DNA采用基因组提取试剂盒回收。结果与常规CHIP相比,改进后的CHIP获得纯度更高的样品DNA。结论改进后方法更适用于细胞染色质免疫共沉淀,使细胞中基因表达调控研究中DNA提取与鉴定更高效。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 CHIP实验流程
        1.2.1 细胞处理
        1.2.2 交联
        1.2.3 超声裂解
        1.2.4 样品-抗体-磁珠耦合与孵育
        1.2.5 洗涤
        1.2.6 交联
        1.2.7 基因组DNA纯化
        1.2.8 引物设计
        1.2.9 PCR扩增体系
2 结果
    2.1 SREBP-1c 启动子区的分析
    2.2 检验染色质超声破碎的效果
    2.3 解交联结果
    2.4 DNA纯化及PCR
3 讨论



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