水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外域基因的真核细胞稳定表达及其免疫反应性的初步研究

发布时间：2017-06-01 10:03

  本文关键词：水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外域基因的真核细胞稳定表达及其免疫反应性的初步研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(g E)的胞外域基因,应用g E抗原建立VZV感染的血清学试验来评价VZV疫苗的免疫效果。方法构建含有VZV g E胞外域基因的真核表达质粒p CDNA3.1-g E,测序后脂质体转染COS-7细胞,经G418筛选出稳定表达VZV g E的细胞株。采用RT-PCR法检测VZV g E的mRNA,Western blot和间接免疫荧光法检测g E的免疫反应性,表达产物经Ni2+-NTA柱纯化后包被ELISA板,对127份0~10岁正常儿童血清中VZV-Ig G抗体水平进行检测。结果成功筛选出能够稳定表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,RT-PCR检测到g E的mRNA,经Western blot和间接免疫荧光鉴定,g E具有明显的免疫反应性,COS-7细胞株和其培养上清液中均有g E融合蛋白,表达量约为0.632 mg/ml,纯度约为90%。ELISA实验检测了127份0~10岁儿童血清中VZV-Ig G抗体,总阳性率为81.89%,特异度和灵敏度分别为93.75%和88.24%。结论本实验获得稳定高效表达VZV g E胞外域基因的COS-7细胞株,建立的ELISA血清学检测方法有助于VZV感染的流行病学研究和对易感人群VZV感染的诊断和预防。
【作者单位】： 安徽医科大学微生物学教研室;哥伦比亚大学病理与细胞生物系;
【关键词】： 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白E 转染 真核稳定表达 血清学试验
【基金】：国家自然科学基金(编号:30872253) 安徽省科技厅科技攻关项目(编号:08010302179) 校企合作实践教育基地(编号:2012sjjd014)
【分类号】：R373
【正文快照】： 2014-11-25接收水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)属疱疹病毒α亚科,为双链DNA病毒,原发感染引起水痘,患儿的全身症状和皮疹消退以后有少量残存的病毒会终身潜伏于宿主的脊髓后根神经节、颅神经节和肠道神经节的神经细胞中[1-2]。日后当机体免疫力降低时,潜伏在

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本文编号：412320