let-7f对骨髓间充质干细胞增殖的影响

发布时间：2017-06-08 08:02

  本文关键词：let-7f对骨髓间充质干细胞增殖的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:micro RNA let-7f和炎性因子白细胞介素6对骨髓间充质干细胞的具体作用及两者之间是否存在联系尚不可知。目的:分析let-7f及白细胞介素6表达水平对骨髓间充质干细胞增殖的影响及两者的关系。方法:1构建let-7f过表达及抑制慢病毒载体,分别转染SD大鼠骨髓间充质干细胞,实验分为4个组:转染上调组(转染LV-rno-let-7f-up)、转染下调组(转染LV-rno-let-7f-down)、阴性转染组(转染空病毒)、未转染组(不进行病毒转染)。q RT-PCR检测各组细胞let-7f表达水平。MTT法、流式细胞术和ELISA等方法检测不同let-7f表达水平下细胞增殖情况及白细胞介素6表达水平,q RT-PCR及Western blot检测各组Cyclin D1 m RNA和蛋白表达水平。2预测let-7f潜在的靶基因,构建野生型/突变型白细胞介素6 3’UTR报告基因载体,分别与let-7f/let-7f inhibitor共转染293T细胞系,测定荧光素酶活性。结果与结论:let-7f转染上调组较未转染组及阴性转染组细胞增殖能力及克隆能力明显增强,G1期细胞数明显减少,S期明显增多,凋亡减少(P0.05);转染下调组结果与其相反。let-7f转染上调组细胞培养液中的白细胞介素6表达水平低于未转染组及阴性转染组(P0.05);转染下调组细胞培养液中的白细胞介素6则明显升高(P0.05);Western blot、定量PCR显示let-7f转染上调组Cyclin D1蛋白及m RNA表达上调(P0.05);转染下调组表达均下调(P0.05);未转染组与阴性转染组所有结果无明显差异(P0.05)。野生型白细胞介素6 3’UTR报告基因载体与let-7f共转染细胞的荧光素酶活性显著减低(P0.05)。结果表明上调let-7f表达水平可显著促进骨髓间充质干细胞增殖活性及克隆形成能力,减少凋亡,而下调let-7f表达水平则出现抑制作用。白细胞介素6过表达可抑制骨髓间充质干细胞增殖,考虑白细胞介素6是let-7f的靶基因,let-7f可能通过抑制白细胞介素6表达而促进细胞增殖。
【作者单位】： 郑州大学第一附属医院神经内科;
【关键词】： 骨髓 间质干细胞 白细胞介素 细胞增殖 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 let-f 骨髓间充质干细胞 慢病毒 国家自然科学基金
【基金】：国家自然科学基金项目:骨髓间质干细胞神经命运决定中的自噬现象及其mTOR信号通路的作用(81071114);Lin28/Let-7调控的骨髓间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病的实验研究(81371385)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 0引言Introduction骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)是干细胞家族的重要成员,具有多向分化潜能,在特定的诱导条件下可在体内或体外分化为骨、软骨、韧带、肌腱、肌肉、脂肪、肝、心肌、内皮、神经等多种组织细胞[1-6]。由于具有取材广泛、易于分离

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本文编号：431837