梅毒螺旋体重组蛋白TpF1在梅毒血清学诊断中的应用

发布时间：2017-06-13 16:02

  本文关键词：梅毒螺旋体重组蛋白TpF1在梅毒血清学诊断中的应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：构建梅毒螺旋体(Treponema palludim, Tp)重组蛋白TpF1的原核表达载体，在大肠杆菌中进行诱导表达，纯化表达产物并进行免疫原性和免疫反应性分析，为进一步探索重组蛋白TpF1在梅毒血清学诊断中的应用及其生物学功能提供一定的实验依据。 方法：从GenBank获取TpF1基因序列，设计引物，以Tp Nichols标准株基因组DNA为模板，PCR扩增其全基因片段；构建pET28a-TpF1原核表达载体，酶切、测序鉴定后，转化至表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中，IPTG诱导重组蛋白TpF1的表达，SDS-PAGE和WesternBlot对表达产物进行分析、鉴定；用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白，BCA法测定蛋白浓度；收集重组蛋白免疫兔血清、Tp Nichols标准株和Tp临床分离株（nhgz01和nhgz02）感染兔血清，，WesternBlot检测重组蛋白TpF1的免疫原性和免疫反应性；建立TpF1-ELISA方法，分别检测各期梅毒患者血清、交叉血清及阴性血清，初步评价重组蛋白TpF1在梅毒血清学诊断中的应用价值。 结果：通过PCR扩增获得约500bp大小目的片段；pET28a-TpF1重组质粒经双酶切鉴定和基因测序分析证实插入片段为TpF1目的基因序列；SDS-PAGE结果显示，在IPTG诱导下，E.coli BL21表达菌成功表达了一相对分子量（Mr）约为20kDa的目的蛋白，目的蛋白在表达菌中能够以可溶性蛋白形式表达；利用纯化的重组蛋白TpF1免疫新西兰兔，ELISA法测定兔免疫血清特异性抗体效价在1:20480以上；WesternBlot检测结果显示兔免疫血清、Tp Nichols标准株和Tp临床分离株（nhgz01和nhgz02）感染兔血清与重组蛋白TpF1有特异性抗体反应；建立的TpF1-ELISA法检测各期梅毒阳性血清、交叉血清及阴性血清，其特异性和敏感性分别为100%和98%。 结论： 1成功构建了pET28a-TpF1原核表达载体，并在E.coli BL21表达菌中表达出相对分子量（Mr）为20kDa的重组蛋白TpF1。 2重组蛋白TpF1具有较强的免疫原性，能诱导新西兰兔产生高效价的特异性抗体。 3重组蛋白TpF1具有良好免疫反应性，检测梅毒血清的敏感性和特异性分别为98%和100%，可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一。
【关键词】：梅毒螺旋体 梅毒 TpF1 血清学诊断 重组蛋白
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R377.1
【目录】：

• 主要缩略语英文索引4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 1. 前言10-13
• 2. 实验材料13-16
• 3. 实验方法16-28
• 4. 实验结果28-40
• 5. 讨论40-43
• 6. 结论43-44
• 参考文献44-47
• 附录47-49
• 文献综述49-61
• 参考文献57-61
• 硕士期间发表论文情况61-62
• 致谢62

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 蒋传好;赵飞骏;吴移谋;;梅毒螺旋体致病相关蛋白的研究进展[J];中南医学科学杂志;2011年05期

2 ;Translational medicine in China Ⅰ:Perspectives from Chinese physicians and scientists[J];Science China(Life Sciences);2011年12期

3 ;Some research advances of immune mechanism during infection in China[J];Science China(Life Sciences);2011年12期

4 马强;耿焱;黄茂梁;吴英松;李明;;梅毒螺旋体0751基因的克隆、表达及鉴定[J];热带医学杂志;2011年06期

5 梁芳;曾朝阳;李桂源;;鼻咽癌相关固有免疫分子及其潜在临床转化前景[J];转化医学杂志;2013年01期

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 王玉丽;早期梅毒患者TLR2的表达及其与Th细胞亚群的相关性研究[D];山西医科大学;2011年

2 裴瑞青;梅毒螺旋体粘附蛋白Tp0155、Tp0483通过激活NF-κB诱导人巨噬细胞产生炎性细胞因子[D];南华大学;2011年

3 姚玲;梅毒螺旋体黏附素Tp0751抗原表位的预测与鉴定[D];南华大学;2013年

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本文编号：446929