靶向RECQL4基因的shRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定

发布时间：2017-06-13 16:02

  本文关键词：靶向RECQL4基因的shRNA慢病毒表达载体的构建及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建介导RECQL4 RNA干扰的shRNA慢病毒表达载体。方法将人工合成的RECQL4 siRNA经PCR扩增后与线化的p LKO.1慢病毒表达载体连接,经测序鉴定后,将p LKO.1-RECQL4-shRNA与慢病毒包装质粒共转染入HEK-293T细胞,产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。体外感染人结肠癌细胞RKO后,实时定量PCR和Western blot检测RECQL4 mRNA和蛋白的沉默效果。设置未加入任何慢病毒表达载体的RKO细胞为未感染组,感染p LKO.1-scramble-shRNA慢病毒载体为阴性对照组。结果基因测序结果证实成功构建p LKO.1-RECQL4-shRNA慢病毒表达载体。测定包装后的慢病毒颗粒滴度为6.70×107IU/m L。感染RKO细胞后,RECQL4的mRNA和蛋白表达量均低于阴性组和未感染组。结论成功构建靶向RECQL4基因的shRNA慢病毒表达载体,可有效抑制人结肠癌RKO细胞RECQL4 mRNA和蛋白的表达。
【作者单位】： 中山大学附属第六医院食管胃肠外科;
【关键词】： 慢病毒表达载体 RECQL shRNA 结肠癌
【基金】：广东省科技计划项目(编号:2010B031500009) 高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(编号:2011017110075)
【分类号】：R373
【正文快照】： RECQ解螺旋酶基因突变和表达异常能导致严重的细胞缺陷。在哺乳动物中包含有5个成员:WRN、BLM、RECQL、RECQL4和RECQL5。RECQL4(RECQprotein-like 4)作为RECQ解螺旋酶家族的一个成员,在多种肿瘤如骨肉瘤、前列腺癌、乳腺癌和宫颈癌等均可见其突变或过表达[1-4]。2012年6月至20

【共引文献】

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本文编号：446924