金黄色葡萄球菌IsdB表位蛋白与HBc蛋白融合表达

发布时间：2017-06-14 14:16

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【摘要】：目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并转化入E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-PAGE分析蛋白可溶性及相对分子质量;BCA法测蛋白浓度;采用免疫接种法检测重组蛋白的免疫活性。40只小鼠随机分为rIsdB+adjuvant组、HBc-IsdB50-285+adjuvant组、HBcIsdB50-285组和PBS组,每组10只,间接ELISA法检测小鼠特异性IgG效价值,采用金黄色葡萄球菌Newman株对免疫后小鼠攻毒,检测各组小鼠重组蛋白免疫保护效果。结果:表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285经测序及酶切鉴定证明构建正确;SDS-PAGE分析,重组蛋白以部分可溶形式存在于培养上清中,相对分子质量约为44 000,亲和纯化后蛋白质水平为1.0g·L-1。ELISA检测,使用rIsdB蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvan组小鼠血清特异性抗体滴度的效价值低于rIsdB+adjuvant组(P0.01);使用HBc-IsdB50-285蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvant组的小鼠血清特异性抗体滴度的效价值高于rIsdB+adjuvant和HBc-IsdB50-285组。攻毒实验,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球菌免疫保护率低于rIsdB+adjuvant组,但差异无统计学意义(P0.05);且其与HBc-IsdB50-285未添加佐剂组比较差异也无统计学意义(P0.05);与PBS组比较,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球免疫保护率升高(P0.01),HBc-IsdB50-285组小鼠对金黄色葡萄球菌攻毒保护率亦升高(P0.05)。结论:HBc-IsdB50-285原核表达载体构建成功;在大肠杆菌中成功表达具有较好生物活性的HBc-IsdB50-285融合蛋白。
【作者单位】： 内蒙古民族大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室;内蒙古民族大学医学院病原生物学与免疫学教研室;吉林省集安益盛药业股份有限公司;
【关键词】： 金黄色葡萄球菌 乙型肝炎病毒核心蛋白 铁调节表面决定因子B 表位
【基金】：内蒙古自治区科技厅自然科学基金资助课题(2011BS0401) 内蒙古民族大学博士科研启动基金资助课题(BS280)
【分类号】：R378.1;Q78
【正文快照】： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一种广泛存在人和动物体内的革兰阳性球菌,可以在皮肤、泌尿生殖道、消化道和呼吸道引起化脓性感染,严重者可以引起全身性脓毒血症[1]。金黄色葡萄球菌在漫长的进化过程中,出现了大量的耐药株,以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR

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本文编号：449724