重组结核分枝杆菌ESAT6和CFP10混合抗原及融合抗原诊断结核病的研究

发布时间：2017-06-16 03:13

  本文关键词：重组结核分枝杆菌ESAT6和CFP10混合抗原及融合抗原诊断结核病的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：结核病是由结核分枝杆菌感染所致的一种慢性传染病。6kDa早期分泌性抗原靶(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP10)是结核分枝杆菌表达的特异性蛋白,具有潜在的诊断应用价值。本文利用重组DNA技术表达重组抗原ESAT6和CFP10及其融合抗原CFP10-ESAT6,分析其免疫活性,比较ESAT6和CFP10(?)混合抗原和融合抗原CFP10-ESAT6诊断结核病的能力,为肺结核(Tuberculosis,TB)的诊断提供新的实验依据。 方法：①采用聚合酶链反应自结核分支杆菌标准株基因组DNA中扩增esat6基因,亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a(+)-esat6,免疫印迹法分析其表达。②分别大量诱导原核表达菌株pET-28a(+)-esat6/BL21、pQE30-cfp10/JM109和pQE30-cfp10-ESAT6/BL21表达重组蛋白ESAT6、CFP10和CFP10-ESAT6融合蛋白,金属螯合层析予以纯化,免疫印迹分析抗原活性；③分别以ESAT6与CFP10的混合抗原和CFP10-ESAT6融合蛋白作为抗原包板,ELISA评价其诊断结核病的能力。 结果：①从结核杆菌基因组DNA扩增esat6基因,经克隆至T-载体后,亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),成功构建了重组表达质粒pET-28a(+)-esat6,表达的ESAT6具有良好的反应原性。②重组蛋白ESAT6、CFP10或CFP10-ESAT6融合蛋白获得大量表达,金属螯合层析纯化获得了ESAT6、CFP10和CFP10-ESAT6融合蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原活性。③ESAT6和CFP10混合抗原诊断结核病的灵敏度为85.0%,特异性为95.0%,阳性预测值为94.4%,阴性预测值为86.4%；CFP10-ESAT6融合蛋白诊断结核病的灵敏度为75.0%,特异性为92.5%,阳性预测值为90.9%,阴性预测值为78.7%。 结论：①成功构建了重组表达质粒pET-28a(+)-esat6。②纯化的重组蛋白ESAT6、CFP10或CFP10-ESAT6融合蛋白具有良好的抗原活性。③ESAT6和CFP10混合抗原和CFP10-ESAT6(?)虫合蛋白诊断结核病具有较好的一致性
【关键词】：结核分枝杆菌 ESAT6 CFP10 结核病 诊断
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R521;R392
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 1.绪论10-12
• 2.材料与方法12-25
• 3.结果25-32
• 3.1 esat6基因的扩增25
• 3.2 esat6基因的克隆25-26
• 3.3 重组pET-esat6质粒的构建26
• 3.4 重组ESAT-6蛋白的表达与鉴定26-27
• 3.5 重组ESAT-6蛋白的纯化与鉴定27-28
• 3.6 重组CFP10蛋白的纯化与鉴定28
• 3.7 重组CFP10-ESAT-6融合蛋白的纯化与鉴定28-29
• 3.8 ESAT6和CFP10混合抗原的ELISA诊断结核病29-30
• 3.9 CFP10-ESAT6融合抗原ELISA诊断结核病30-31
• 3.10 混合抗原和融合抗原诊断结核病的比较31-32
• 4.讨论32-36
• 5.结论36-37
• 参考文献37-39
• 综述39-48
• 参考文献44-48
• 中英文缩略词对照表48-49
• 附录49-50
• 致谢50-51

【参考文献】

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本文编号：454276