基于人乳头瘤病毒16型L2的新型宫颈癌预防性疫苗研究

发布时间：2017-06-16 19:00

  本文关键词：基于人乳头瘤病毒16型L2的新型宫颈癌预防性疫苗研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：宫颈癌是发病率仅次于乳腺癌的第二大妇科恶性肿瘤。目前的治疗措施主要是根据癌症分期选择进行手术及放化疗，但治疗费用高，易复发。大量流行病学数据表明，高危型人乳头瘤病毒（Humanpapillomavirus，HPV）与宫颈癌的发生密切关系，是导致宫颈癌的主要病因。因此，通过研发疫苗预防HPV的早期感染可能是目前降低宫颈癌发病率较为经济有效的策略。 目前，在欧美上市的的宫颈癌预防性疫苗是基于HPV主要衣壳蛋白L1的病毒样颗粒（Virus-LikeParticles，VLPs）亚单位疫苗，可诱导机体产生型别特异性的中和抗体，不同型别之间鲜有交叉保护，但若通过增加价位来扩大疫苗保护范围则又会增加疫苗的安全风险。近来的研究发现，HPV次要衣壳蛋白L2的N端区域含有保守的共同表位，能够诱导产生具有交叉保护效力的中和抗体，是很有前景的新一代宫颈癌预防性疫苗。然而，HPVL2N段多肽免疫原性普遍偏低，这制约了该疫苗的进一步应用。 本课题将蛋白转导域多肽（Proteintransductiondomain，，PTD）作为多肽佐剂与不同的HPV16L2N端多肽片段以融合或混合的方式结合构建了一系列重组蛋白疫苗；同时，我们还构建了表达HPV16L2N段或全长蛋白的重组腺病毒疫苗，并通过动物实验对重组蛋白疫苗和重组腺病毒疫苗的免疫效果进行了系统评价。结果如下：（1）间接ELISA结果显示，各重组蛋白疫苗均可诱导产生特异性抗体，抗体滴度与疫苗抗原大小呈正相关。（2）假病毒颗粒中和实验显示，PTD与HPV16L2N端多肽构成的融合蛋白可以诱导产生较高滴度的交叉中和抗体，且可明显提高中和抗体在总抗体中的比例。（3）含HPV16L2全长基因的重组腺病毒既可诱导产生具有交叉保护效力的中和抗体，又可刺激产生特异性细胞免疫应答。 综上，融合表达PTD可显著提高L2N段多肽的免疫原性，其体液免疫增强效果与疫苗抗原大小呈正相关。L2重组腺病毒疫苗可刺激较好的细胞免疫应答，两种形式的疫苗结合使用将可提供更全面的保护效力。
【关键词】：HPV16L2 PTD 重组腺病毒 宫颈癌 疫苗
【学位授予单位】：北京工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R737.33;R392
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 主要英文缩写词6-9
• 第1章 绪论9-15
• 1.1 HPV16L2及其研究现状9-11
• 1.1.1 HPV与宫颈癌9-10
• 1.1.2 基于L2的疫苗研究进展10-11
• 1.1.3 方向和展望11
• 1.2 蛋白转导域（PTD）的研究进展11-12
• 1.3 本课题研究内容12-13
• 1.4 本课题技术路线13-15
• 第2章 HPV16L2重组蛋白疫苗的构建15-25
• 2.1 实验材料15-16
• 2.1.1 质粒和菌株15
• 2.1.2 工具酶及主要试剂15
• 2.1.3 主要仪器设备15-16
• 2.1.4 引物16
• 2.2 实验方法16-20
• 2.2.1 重组HPV16L2蛋白构建16-18
• 2.2.2 重组HPV16L2蛋白表达18-19
• 2.2.3 重组HPV16L2蛋白纯化19-20
• 2.3 实验结果和讨论20-24
• 2.3.1 PCR扩增重组HPV16L2基因片段的结果20
• 2.3.2 重组HPV16L2质粒的酶切鉴定和测序结果20
• 2.3.3 重组HPV16L2蛋白表达条件优化结果20-22
• 2.3.4 重组HPV16L2蛋白纯化结果22-24
• 2.4 本章小结24-25
• 第3章 含HPV16L2h基因的重组腺病毒疫苗的构建25-35
• 3.1 实验材料25-26
• 3.1.1 质粒、细胞和菌株25
• 3.1.2 工具酶及主要试剂25
• 3.1.3 主要仪器设备25-26
• 3.1.4 引物26
• 3.2 实验方法26-30
• 3.2.1 重组穿梭质粒pDC316的构建26-28
• 3.2.2 重组腺病毒的包装28-29
• 3.2.3 重组腺病毒的鉴定29
• 3.2.4 重组腺病毒疫苗的大量扩增和纯化29-30
• 3.2.5 重组腺病毒的滴度测定30
• 3.3 实验结果和讨论30-34
• 3.3.1 PCR扩增HPV16L2h基因片段的结果30
• 3.3.2 重组质粒pDC316的酶切鉴定结果30-31
• 3.3.3 重组腺病毒的HPV16L2h基因和复制缺陷型的鉴定31-33
• 3.3.4 重组腺病毒表达HPV16L2h相关蛋白水平的检测33
• 3.3.5 重组腺病毒的滴度测定结果33-34
• 3.4 本章小结34-35
• 第4章 重组蛋白疫苗和重组腺病毒疫苗免疫效果的研究35-47
• 4.1 实验材料35-36
• 4.1.1 细胞和疫苗35
• 4.1.2 主要试剂35
• 4.1.3 主要仪器设备35-36
• 4.1.4 实验动物36
• 4.2 实验方法36-40
• 4.2.1 免疫小鼠36-37
• 4.2.2 ELISA和假病毒中和滴定检测体液免疫37-38
• 4.2.3 ELISPOT检测细胞免疫反应38-40
• 4.3 实验结果和讨论40-45
• 4.3.1 体液免疫结果40-43
• 4.3.2 T细胞表位肽预测结果43
• 4.3.3 细胞免疫结果43-45
• 4.4 本章小结45-47
• 结论47-49
• 参考文献49-53
• 攻读硕士学位期间所申请的发明专利53-55
• 致谢55

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1 周林;骆丹;;HPV-16,-18型致宫颈癌机制及其疫苗研究[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2008年05期

2 孙海艳;袁亚敏;魏绍斌;;HPV感染与宫颈癌的预防[J];江西中医药;2006年09期

3 林海英;付晓丹;罗桂晶;张玉泉;;宫颈癌人乳头瘤病毒疫苗的研究进展[J];中国实用妇科与产科杂志;2007年06期

4 郭天棋,李诚信;人乳头瘤病毒感染与宫颈癌[J];中国实用妇科与产科杂志;2001年11期

5 袁光文,吴令英;人乳头瘤病毒疫苗防治宫颈癌研究的新进展[J];癌症进展;2004年05期

6 孙文超;朱春芝;;宫颈人乳头瘤病毒感染的中西药物治疗进展[J];实用医学杂志;2010年21期

7 汪希鹏;;预防性四联HPV疫苗(HPV6,11,16,18)在年轻妇女人群防止HPV感染相关疾病的研究:多中心随机双盲病例-对照临床II期研究[J];国外医学(妇产科学分册);2006年05期

8 魏丽惠;重视子宫颈病变中HPV的筛查[J];中国妇产科临床杂志;2004年06期

9 张银川;周旭;王玉琳;;宫颈癌预防性疫苗的研发现状与挑战[J];微生物学免疫学进展;2006年02期

10 曹玲;;第一支癌症疫苗[J];科学世界;2007年12期

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1 吴敬波;杨红茹;何丽佳;吴天革;任培蓉;尚昌玲;向莉;张艳玲;张建文;;局部植入缓释氟尿嘧啶配合热放疗治疗宫颈癌临床初步研究[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年

2 屠铮;崔恒;;卵巢移位手术在宫颈癌治疗中的应用[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年

3 叶喜阳;马利国;谢梅青;;雌激素补充治疗对宫颈癌术后卵巢功能丧失者生存质量的影响[A];中华医学会第三次全国绝经学术会议暨绝经相关问题学习班论文汇编[C];2011年

4 施铮铮;朱华;张虎祥;万丽;胡燕;郑飞云;;凋亡抑制蛋白Livin在宫颈癌及癌前病变中的表达[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

5 朱莲英;吕弘道;徐勇;;吴江农村已婚育龄妇女宫颈癌早期筛查[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

6 孙迪;沈宜;;宫颈癌HeLa细胞抑癌蛋白FBW7调控机制研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

7 赵方辉;Adam K.Lewkowitz;Margaret Jane Lin;胡尚英;张询;潘秦镜;马俊飞;玛依努尔.尼亚孜;李长卿;李淑敏;Jennifer S.Smith;Jerome L.Belinson;乔友林;Philip E.Castle;;自我取样HPV DNA检测作为经济欠发达地区宫颈癌初筛的替代手段:5项以人群为基础的筛查试验pooled分析[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年

8 彭芝兰;王平;曹泽毅;黎培毅;张崇淑;;1187例手术治疗宫颈癌临床病理分析[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第七次全国学术会议论文汇编[C];2003年

9 孔凡斌;王智彪;伍烽;白晋;赵颉;周毓青;常才;;高强度超声治疗对宫颈癌小鼠再次接种同种肿瘤的抑制作用[A];2005年上海市生物医学工程学会学术年会论文集[C];2005年

10 肖雪梅;郑树香;张莹莹;;宫颈癌患者放疗期间情绪焦虑的心理干预[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2003年

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1 陶映荃;贫困地区预防宫颈癌研究启动[N];工人日报;2003年

2 通讯员 李静　记者 马跃华;厦大研制国内首支宫颈癌疫苗[N];光明日报;2010年

3 记者 杜星星;昌吉市4万农牧区妇女接受免费宫颈癌检查[N];昌吉日报;2010年

4 本报记者 白轶南;宫颈癌 女性第二索命恶魔[N];保健时报;2004年

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8 指导专家：安徽省中医院妇科主任、硕士研究生导师 李伟莉 见习记者 许红;女人花为何凋零红尘中[N];医药导报;2005年

9 记者　刘欢;世界首个癌症疫苗6月问世[N];北京日报;2006年

10 容小翔;无性乱的妇女为何患宫颈癌[N];卫生与生活报;2007年

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1 徐洪斌;宫颈癌新辅助化疗和影响根治性治疗后预后因素的评估[D];华中科技大学;2011年

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3 张丽华;宫颈癌调强放射治疗的研究[D];复旦大学;2012年

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5 孔凡斌;高强度超声治疗对宫颈癌小鼠免疫功能的影响[D];重庆医科大学;2002年

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7 陶光实;B7修饰的U14细胞疫苗和HPV16E6/B7重组基因疫苗预防及治疗宫颈癌实验研究[D];中南大学;2003年

8 程玺;高危宫颈癌患者根治术后综合治疗和实验研究[D];复旦大学;2004年

9 任庆兰;c-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸对卵巢癌和宫颈癌放射敏感性影响的实验研究[D];重庆医科大学;2004年

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1 郭艳涛;基于人乳头瘤病毒16型L2的新型宫颈癌预防性疫苗研究[D];北京工业大学;2013年

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8 王瑛;FHIT基因甲基化与宫颈癌发生的关系研究[D];山西医科大学;2004年

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10 张利群;检测宫颈癌患者血清胰岛素样生长因子-Ⅱ浓度的临床意义[D];吉林大学;2005年

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