乳鼠骨髓来源间充质干细胞抑制树突状细胞成熟和T淋巴细胞增殖的实验研究

发布时间：2017-06-17 10:10

  本文关键词：乳鼠骨髓来源间充质干细胞抑制树突状细胞成熟和T淋巴细胞增殖的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的初步研究小鼠乳鼠骨髓源性间充质干细胞（BM-MSCs）的分离培养、纯化方法，并进行细胞表面标志和体外分化能力的鉴定；检测骨髓源性间充质干细胞对于树突状细胞（DCs）抑制成熟的作用，以及对异体T淋巴细胞的抑制作用。 方法全骨髓贴壁法分离培养C57BL/6乳鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs），经过传代纯化后的第四代细胞，流式细胞仪检测细胞表面CD34、CD29、CD105、MHC-Ⅱ抗原的表达；同时取第四代细胞体外诱导向成脂、成骨方向分化以鉴定MSCs。获取Balb/c小鼠骨髓细胞，在含重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF(20μg/L)和重组小鼠白细胞介素4（IL-4，10μg/L)的完全培养基中对其进行诱导培养及扩增，培养至第8天收获DCs；实验分为4组：单纯对照组，LPS刺激组， DCs加MSCs共培养组，LPS刺激的DCs加MSCs共培养组；用流式细胞学检测DCs的表面标志CD11C、CD86、MHC-Ⅱ的变化。建立混合淋巴细胞反应体系，检测MSCs体外抑制T淋巴细胞增殖的能力，实验分为3组：阴性对照组为C57BL/6的T淋巴细胞，，空白对照组的DCs刺激T淋巴细胞，实验干预组为MSCs于DCs共培养后刺激T淋巴细胞。 结果小鼠乳鼠提取培养出的骨髓源性MSCs,体外可以大量增殖，细胞干性稳定；纯化后的第四代可以向成骨、成脂方向分化，并且MSCs经流式细胞术检测CD29、MHC-Ⅱ、CD105及CD34表分别为98.300%、0.898%、45.400%、0.849%，符合MSCs抗原表达。BM-MSCs与DCs的共培养，抑制了DCs表面MHC-Ⅱ和共刺激分子CD86的表达，抑制DCs的发育成熟，这种阻碍作用不可被脂多糖（LPS）所逆转。MSCs对DCs诱导的T淋巴细胞增殖有抑制作用，空白对照组组CD4+T细胞和CD8+T细胞的分裂比例分别为30.8%和33.4%，MSCs干预组CD4+T和CD8+T细胞的分裂比例分别为5.36%和3.94%。 结论随着供体年龄的增长，骨髓间充质干细胞的数量减少，增殖能力衰退；本实验探究出乳鼠提取培养BM-MSCs的方案，并且证实提取出的细胞在体外具有强烈的免疫抑制作用，应用MSCs可以抑制DCs的成熟，对T淋巴细胞的增殖亦有抑制作用，从而为诱导移植免疫耐受提供了一种新的途径。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 树突状细胞 T淋巴细胞增殖
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 全文主要缩略5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-20
• 一．材料13-15
• 二．mMSCs 的分离及培养15-16
• 三．流式细胞仪检测 mMSCs 表面标志16
• 四．mMSCs 诱导分化能力的鉴定：成骨和成脂细胞诱导16-17
• 五．小鼠骨髓源性树突状细胞（BM-DCs）的分离和培养17
• 六．流式细胞学鉴定 BMDCs 的表面标志17-18
• 七．MSCs 与 DCs 共培养18
• 八．CFSE 方法检测 T 淋巴细胞增殖18-19
• 九．统计学处理19-20
• 结果20-24
• 一．BM-MSCs 形态学观察20
• 二．BM-MSCs 表面标记的测定20-21
• 三．BM-MSCs 多向分化的能力鉴定21-22
• 四．间充质干细胞（MSCs）增殖曲线22
• 五．MSCs 对 LPS 刺激的 DCs 表面分子表达的影响22-23
• 六．MSCs 干预后的 DCs 抑制同种混合淋巴细胞反应23-24
• 讨论24-26
• 参考文献26-28
• 综述28-47
• 参考文献37-47
• 致谢47-48

【参考文献】

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本文编号：458062