人组织型谷氨酰胺转氨酶基因的克隆 表达及纯化

发布时间：2017-06-18 12:06

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【摘要】：目的:克隆人组织型谷氨酰胺转氨酶基因,并进行原核表达及纯化。方法:从Caco-2细胞中提取总RNA,利用RT-PCR克隆人组织型谷氨酰胺转氨酶基因,然后将其连接到原核表达载体pET-32a。将构建成功的重组表达载体pET-32a-TG2导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达His-TG2融合蛋白。用Ni-NTA蛋白纯化柱对融合蛋白进行纯化,采用Western Blotting检测重组蛋白的特异性。结果:成功克隆出人组织型谷氨酰胺转氨酶基因,构建了pET-32a-TG2原核表达载体,并成功诱导了重组融合蛋白His-TG2的表达。结论:构建了表达人组织型谷氨酰胺转氨酶基因的原核表达系统,并成功对重组蛋白进行了纯化。
【作者单位】： 长治医学院心血管病研究所;
【关键词】： 人组织型谷氨酰胺转氨酶基因 原核表达 蛋白纯化
【基金】：长治医学院科技创新团队资助项目(CX201401)
【分类号】：Q78;R363
【正文快照】： 谷氨酰胺转氨酶(Transglutaminase,TGase,EC2.3.2.12)是一种催化蛋白质分子内或分子间的交联、蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨酰胺基水解的酶[1]。TGase首次是在豚鼠的肝脏中发现的,随后证实TGase在植物、动物及微生物中均存在[2-4]。对哺乳动物的研究发现TGas

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