不同物种细胞色素C的抗氧化能力分析
发布时间：2017-06-18 16:15
本文关键词：不同物种细胞色素C的抗氧化能力分析，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：本研究的核心内容是不同物种来源的细胞色素C对线粒体活性氧产生的调节作用的比较分析，并试图将细胞色素C对活性氧的清除能力与其分子结构微变化进行一定的联系，为以后阐述细胞色素C对人类疾病和寿命的影响打下基础。 细胞色素c是一个以血红素c为辅基的小而稳定的血红素蛋白，在细胞的能量代谢、细胞凋亡及自由基调节等诸多方面均起到重要的作用[1]。本实验组早期结果发现[2,3]，线粒体中存在着细胞色素C介导的电子漏旁路途径，，可以原位的自主消除呼吸链附近的活性氧，使活性氧水平处于一个动态平衡的状态。初步结果还发现，不同物种来源的细胞色素C在相同浓度下其抗自由基的能力不同，在本研究中对其进行了进一步的分析。 我们以去除细胞色素C的心肌制剂为实验系统，以鲁米诺联合辣根过氧化物酶启动的化学发光法测定系统内过氧化氢的含量，以光泽精启动的化学发光法测定系统内超氧阴离子的含量。通过细胞色素C的拆合重组实验测定不同浓度细胞色素C的抗氧化能力，确立了计算不同物种细胞色素C抗氧化能力的两个反应浓度：高浓度（2μM）和低浓度（0.5μM）。选择了来源于酵母、鸽子和牛三个不同物种的细胞色素C，将之放在同样的反应体系中，比较它们的抗氧化能力的差别。同时，我们也比较了细胞色素C在氧化状态和还原状态时其抗氧化能力的不同趋势。 结果显示： 1）在未达到饱和重组浓度的情况下，三个物种的常态细胞色素C对O2伲虷2O2的清除作用随物种不同而不同。清除能力最小的酵母源的细胞色素C只能清除43％的H2O2和63％的O－2伲宄芰ψ钋康母胄叵赴谻对两种ROS的清除能力都在80％～90％。其抗氧化能力排序为鸽胸源牛心源酵母源。而高浓度的细胞色素C由于清除能力过强，未体现显著性差异； 2）加入抗霉素A阻断电子传递后，由于参比值的增加，高浓度重组常态细胞色素C均显示了物种差异，其抗氧化能力排序为鸽胸源牛心源酵母源，与未加入抗霉素A的低浓度重组相同。在低浓度情况下，由于参比的提高，三种细胞色素C对O－2俸虷2O2的消除能力均降到了最大值的40％以下，且无明显差异。 3）全还原态细胞色素C的抗氧化能力也随物种不同而有区别。在高浓度细胞色素C重组的情况下，由于清除能力过强，差异不显著。但在低浓度细胞色素C重组的情况下，鸽胸源的还原态细胞色素C抗氧化能力与酵母源的还原态细胞色素C的抗氧化能力相当，强于牛心源的还原态细胞色素C。也就是说，其抗氧化能力的排序与常态细胞色素C相比有所不同。 4）在加入了抗霉素A阻断电子传递链功能后，无论在高浓度重组情况下还是低浓度重组情况下，酵母源和鸽胸源的还原态细胞色素C对ROS的清除能力较强且无显著性差异，而牛心源的还原态细胞色素C清除ROS的能力相对较弱。 因此，大致结论如下：A:细胞色素C的抗氧化能力，无论是通过氧化态消除O2伲哪芰故腔乖鼿2O2的能力，在不同物种来源中均有区别，，其根源在于蛋白质微结构变化的影响。扩大物种的研究范围，对它们的结构进行精细分析，对于探讨延缓衰老、预防老年退行性疾病具有一定的价值。B:由于物种选取的较少，且进化上差异过大，目前无法验证细胞色素C的抗氧化能力是否与物种寿命相关，需进一步实验；C:还原态的酵母细胞色素C在猪心的呼吸链制剂中依然可以发挥其抗氧化能力，并不需要外加细胞色素C过氧化物酶催化，具体机制有待进一步探讨。
【关键词】：细胞色素C 抗氧化 氧化还原状态 物种 蛋白质微结构
【学位授予单位】：天津体育学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：
- 摘要4-6
- ABSTRACT6-9
- 1.前言9-12
- 2.材料与方法12-18
- 2.1 材料来源12
- 2.2 仪器设备12-13
- 2.3 试剂13-14
- 2.3.1 主要试剂及其来源13-14
- 2.3.2 试剂配制14
- 2.4 心肌制剂（HMP）制备14-15
- 2.5 去除细胞色素 C 的心肌制剂（c-dHMP）的制备15
- 2.6 Bradford 法测定蛋白质浓度15
- 2.7 还原态细胞色素 C 的制备15-16
- 2.8 还原态细胞色素 C 的鉴定16
- 2.9 c-dHMP 和 HMP 呼吸能力的测定16-17
- 2.10 O_2~-含量分析17
- 2.11 H_2O_2含量分析17-18
- 2.12 统计学方法18
- 3.实验结果18-35
- 3.1 c-dHMP 的细胞色素 C 重组可以恢复琥珀酸氧化酶活力18-19
- 3.2 还原态细胞色素 C 的光谱学分析19-20
- 3.3 实验用细胞色素 C 浓度的选择20-24
- 3.3.1 利用超微弱化学发光法测定 O_2~.-的实际图像20
- 3.3.2 利用超微弱化学发光法测定 H_2O_2的实际图像20-21
- 3.3.3 细胞色素 C 对 c-dHMP 产生的 O_2~.-起下调作用21-22
- 3.3.4 细胞色素 C 对 c-dHMP 产生的 H_2O_2起下调作用22-23
- 3.3.5 物种比较实验中细胞色素 C 浓度的选择23-24
- 3.4 不同物种天然态细胞色素 C 消除 O_2.~-的能力比较24-26
- 3.4.1 低浓度（0.5μM）情况下，不同物种的细胞色素 C 对 O_2~.-的清除能力比较24-26
- 3.4.2 高浓度（2 μM）情况下，不同物种的细胞色素 C 对 O_2~.-的清除能力比较26
- 3.5 不同物种天然态细胞色素 C 消除 H_2O_2的能力比较26-27
- 3.6 抗霉素 A 阻断呼吸链对不同物种的天然态细胞色素 C 抗氧化能力的影响27-30
- 3.6.1 在抗霉素 A 的存在下，不同物种细胞色素 C 的清除 O.-2的能力比较28-29
- 3.6.2 在抗霉素 A 的存在下，不同物种细胞色素 C 的清除 H2O2的能力比较29-30
- 3.7 不同物种还原态细胞色素 C 的抗氧化能力分析30-35
- 3.7.1 不同物种还原态细胞色素 C 去除 c-dHMP 系统产生的 O_2賬－的能力比较30-31
- 3.7.2 在抗霉素 A 存在的情况下不同物种还原态细胞色素 C 去除 c-dHMP 系统产生的O_2賬－的能力比较31
- 3.7.3 不同物种还原态细胞色素 C 去除 c-dHMP 系统产生的 H_2O_2的能力比较31-34
- 3.7.4 在抗霉素 A 存在的情况下不同物种还原态细胞色素 C 去除 c-dHMP 系统产生的H_2O_2的能力比较34-35
- 4. 讨论35-43
- 4.1 细胞色素 C 的抗氧化能力与其物种来源具有一定的相关性35-37
- 4.2 细胞色素Ｃ介导的电子漏旁路途径的抗氧化能力与物种相关37-38
- 4.3 不同物种的细胞色素 C 的抗氧化能力与物种寿命是否相关38-41
- 4.4 酵母还原态细胞色素 C 可以在 c-dHMP 系统中消除 H_2O_241-43
- 5.结论43-44
- 参考文献44-50
- 综述50-61
- 参考文献57-61
- 附录61-62
- 致谢62
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 缪明永,王学敏,宋春桥;线粒体、细胞色素c与细胞凋亡[J];生命的化学;1999年02期
本文关键词：不同物种细胞色素C的抗氧化能力分析，由笔耕文化传播整理发布。
本文编号：459981
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