左旋丁苯酞对血管性痴呆模型小鼠海马细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

发布时间：2017-06-19 15:13

  本文关键词：左旋丁苯酞对血管性痴呆模型小鼠海马细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：以C57Bl/6小鼠为研究对象，观察左旋丁苯酞对血管性痴呆(Vascular Dementia，VaD)模型小鼠海马细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。 方法：本研究分为三部分。 以雄性C57Bl/6小鼠为研究对象，采用反复三次结扎双侧颈总动脉的方法，给予脑缺血20min(ischemia，I)-再灌注10min(reperfusion，R)处理，建立VAD小鼠模型，灌胃(ig)给予l-NBP，每日1次，分为5组，每组15只，分别为对照组、模型组、预防组：术前预防给药7d(l-NBP30mg/kg)，低剂量治疗组：术后给药28d(l-NBP30mg/kg)和高剂量预防组：术后给药28d(l-NBP60mg/kg)。在模型制备后的第29天利用Morris水迷宫试验进行学习和空间记忆能力的测试，模型组和模型组各取一只小鼠，灌注取材，留取胼胝体标本行电镜观察；硫堇染色观察海马组织病理学变化；用免疫组织化学法以及Western-blot检测小鼠海马组织中的Bcl-2、Bax的蛋白表达；PCR检测小鼠海马组织中Bcl-2、Bax的mRNA水平。 结果： 1Morris水迷宫试验结果 1.1学习能力结果 1.1.1第一天各组学习成绩无统计学差异。 1.1.2第二天，模型组与模型组相比时间略有延长(P0.05)，低剂量治疗组比模型组时间减少(P0.05)。 1.1.3第三天，低剂量治疗组比模型组上台时间减少(P0.05)。 1.1.4第四天，模型组，低剂量治疗组，预防组均较模型组上台时间缩短，小鼠学习能力趋于稳定。 1.1.5第五天，模型组，低剂量治疗组，高剂量治疗组，预防组均较模型组上台时间缩短，其中以高剂量治疗组和预防组的上台平均时间最短。 1.2记忆能力结果 1.2.1第四象限时间（%） 模型组以及预防组在第四象限停留的时间比模型显著延长（(P0.05）。 2电镜结果 2.1对照组 胼胝体区内血管壁光滑，血管内皮细胞排列紧凑；髓鞘排列规则、紧密，未见脱髓鞘改变。 2.2模型组 血管壁粗糙、增厚，弹力膜中断，弹力纤维、胶原纤维增生，基膜及基板不完整。可见神经纤维不同程度的退行性改变，髓鞘的正常纹理不清，结构紊乱。 3硫堇染色结果 3.1对照组 海马CA1区神经元排列整齐、致密，细胞形态完整、边界清晰，，胞核大而圆、核仁清晰。神经元计数为203.53±11.04。 3.2模型组 在海马CA1区可观察到部分神经元死亡，存在断裂带，残存的神经元胞体皱缩，形态不规则，胞核固缩、浓染，核仁不清或消失。神经元计数为69.23±2.14。同模型组相比P0.05。 3.3低剂量治疗组 海马CA1区细胞数目较对照组少，较模型组略多，细胞形态完整，边界清晰，仅见个别锥体细胞核固缩，减少。神经元计数为114.92±2.08。同模型组相比P0.05。 3.4高剂量治疗组 神经元排列整齐、致密，胞核饱满、核仁较清晰，无明显的细胞缺失。神经元计数189.92±3.18。同模型组相比P0.05. 3.5预防组 大体观察同高剂量治疗组，神经元计数199.92±2.96同模型组相比P0.05。 4Bcl-2/Bax蛋白及mRNA水平 4.1免疫组化以及Western-blot结果均显示模型组较模型组Bcl-2/Bax降低，而应用丁苯酞干预组虽在趋势上显示Bcl-2/Bax升高，但不具备统计学意义。 4.2PCR的结果示：5组数据没有显著地升与降的趋势。 结论： 1通过应用电镜技术对胼胝体超微结构的观察以及经Morris水迷宫试验的行为学测试，证实了本研究的VaD模型制造成功，此模型小鼠存在学习和记忆功能障碍，并且预防性应用左旋丁苯酞可以显著降低血管性痴呆的发生与发展。 2左旋丁苯酞治疗组和预防组的神经元均较模型组有增多。左旋丁苯酞可以逆转VaD小鼠海马组织病理学变化，进而改善其学习和记忆能力。 3在本实验的5组中，模型组中Bcl-2/Bax降低，而左旋丁苯酞干预组虽有数据上的变化，但不具备统计学意义，反复脑缺血再灌注后激活了细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax，阻止了神经元的凋亡，而这一途径不是左旋丁苯酞发挥其治疗血管性痴呆的主要机制。
【关键词】：血管性痴呆 C57Bl/6小鼠 海马 Bcl-2 Bax
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R749.1
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 引言12-13
• 第一部分 血管性痴呆小鼠模型的建立、术后行为学测定及海马病理学变化13-26
• 前言13
• 材料与方法13-18
• 结果18-19
• 附图19-22
• 附表22-23
• 讨论23-24
• 小结24-25
• 参考文献25-26
• 第二部分 观察应用左旋丁苯酞后血管性痴呆小鼠海马的病理学变化26-33
• 前言26
• 材料与方法26-28
• 结果28-29
• 附图29-30
• 附表30-31
• 讨论31
• 小结31-32
• 参考文献32-33
• 第三部分 观察应用左旋丁苯酞后血管性痴呆小鼠海马组织 Bcl-2、Bax蛋白表达的变化33-51
• 前言33
• 材料与方法33-41
• 结果41-42
• 附图42-45
• 附表45-46
• 讨论46-48
• 小结48-49
• 参考文献49-51
• 结论51-52
• 综述一 全脑低灌注型血管性认知功能障碍动物模型制作方法52-61
• 参考文献58-61
• 综述二 缺血致血管性痴呆与细胞凋亡的研究61-67
• 参考文献65-67
• 致谢67-68
• 个人简历68

【参考文献】

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本文编号：462917