TALE-TFs构建方法的建立及优化

发布时间：2017-06-22 14:00

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【摘要】：目的在传统方案的基础上建立一种经济有效且易于操作的类转录激活效应子转录因子(TALE-TFs)的构建和功能检测方案。方法采用基于PCR的Golden gate克隆法分别尝试构建类转录激活效应物(TALEs)的六聚体、五聚体、四聚体和三聚体,比较构建结果,选择最优效果方案进行TALE-TFs的构建。采用片段置换反应(FSR)构建了含有TALE-TFs结合片段的RFP质粒pminCMV,并与TALE-TFs进行共转染,观察红色荧光验证TALE-TFs的转录活性。结果 TALEs中所含的串联重复模块越少,获得的构建产物越多。共转染时,TALE-TFs使得pminCMV成功启动表达。结论该研究为不同条件下实验方案的选择提供了依据,并利用含有TALE-TF结合片段和红色荧光的质粒建立了快捷直观的转录活性验证方法。
【作者单位】： 河南科技大学第一附属医院检验科;重庆医科大学附属第二医院教育部感染性疾病分子生物学重点实验室;
【关键词】： 类转录激活效应物 质粒构建 转录 转染
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81000732)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 类转录激活效应物(TALEs)蛋白家族是来自于植物病原体-黄单胞杆菌的天然细菌效应蛋白。它类似于真核生物的转录因子,通过识别特异DNA序列来调节宿主基因的转录,促进细菌定植。TALEs蛋白中部包含一段由串联重复单体构成的DNA特异识别和结合区域,其中每个单体含有大约34个氨基酸

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 赵美威;段承俐;刘江;;基于类转录激活因子效应物(TALEs)的基因组定点操控技术[J];动物学研究;2013年05期

2 刘畅;冯冲;宋志强;李西睿;王宁;储明星;潘登科;;利用TALENs技术建立基因定点修饰的猪Oct-4-EGFP细胞系[J];中国畜牧兽医;2013年11期

3 陶果;信吉阁;肖晶;刘海京;成文敏;查星琴;曾养志;;基因敲除技术最新研究进展及其应用[J];安徽农业科学;2013年29期

4 何华兰;;TAL效应蛋白研究进展[J];现代农业科技;2014年05期

5 蒋蓉;黄萍;刘国芳;玉延华;姜伟;何勇强;黄胜;;利用酵母双杂法鉴定水稻白叶枯病菌Ⅲ型效应物寄主靶标初探[J];基因组学与应用生物学;2014年03期

6 蒋国凤;;基于TALE的生物工程技术在植物抗病性上的应用[J];基因组学与应用生物学;2015年05期

7 蔡哲彦;万永奇;唐e，

本文编号：471989