重组幽门螺杆菌多表位疫苗工程菌株的构建及其微生物学特性研究

发布时间：2017-06-24 06:07

  本文关键词：重组幽门螺杆菌多表位疫苗工程菌株的构建及其微生物学特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(ureI、ureB)及霍乱毒素B亚单位(ctB)融合片段的多表位疫苗工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选出T细胞和B细胞优势表位,通过柔性Linker相连,并在其N端加入分子内佐剂序列ctB,按照大肠杆菌BL21(DE3)的密码子偏好性进行密码子优化,即为BIB序列。人工合成之后,插入原核表达质粒pET28a(+)中,构建pET28a(+)/ctB-ureI-ureB〔pET28a(+)/BIB〕重组质粒。经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序鉴定正确后,将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。BIB工程菌经乳糖诱导表达后,SDS-PAGE检测重组蛋白BIB的表达情况,并对其N端氨基酸序列和相对分子质量进行测定,Western blot对其进行抗原性鉴定。结果原核表达质粒pET28a(+)/BIB经双酶切和测序鉴定构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量33×103处有一条明显条带,其N端氨基酸序列和相对分子质量与设计序列100%一致,Western blot结果显示BIB可以与抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)小鼠血清及鼠抗CTB单抗产生特异性反应。结论成功构建了幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌,该工程菌表达的BIB蛋白抗原性良好。
【作者单位】： 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室;四川万可泰生物技术有限责任公司;
【关键词】： 幽门螺杆菌 多表位疫苗 尿素酶B亚单位 尿素酶I亚单位 霍乱毒素B亚单位
【基金】：四川省科技厅科技支撑计划项目(No.2014SZ0036)资助
【分类号】：R392
【正文快照】： 随着对抗原表位认识的深入,表位疫苗已成为新型疫苗研究的热点,被认为是继灭活疫苗、亚单位疫苗、活载体疫苗之后的第四代疫苗,其具有免疫反应特异、副作用小和针对性强等优点[1,2]。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染导致机体对H.pylori自身天然抗原产生免疫耐受

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 丁娜娜;杨靖;潘兴;周永君;李建春;祝捷;王保宁;李明远;;幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌的构建及表达特性研究[J];四川大学学报(医学版);2014年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 傅国平;张雪梅;;细菌疫苗的发展历史及研究现状[J];重庆医学;2013年26期

2 潘兴;王保宁;杨靖;李健春;祝捷;周永君;王红仁;李明远;李婉宜;;幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究[J];成都医学院学报;2014年05期

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7 赵祥;徐欢;张欣;熊昌辉;马贤纵;安家昆;章金勇;;幽门螺杆菌黏附素A的原核表达、纯化及其结晶条件搜索[J];中国生物制品学杂志;2014年03期

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9 万裕辉;温泳涛;张，

本文编号：477261