wnt3a,wnt3诱导小鼠肝前体细胞上皮间质转化及迁移的研究

发布时间：2017-06-24 07:16

  本文关键词：wnt3a,wnt3诱导小鼠肝前体细胞上皮间质转化及迁移的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 利用重组腺病毒Ad-GFP-wnt3a和Ad-GFP-wnt3，分别转染小鼠肝前体细胞，使其获得高表达。通过观察比较高表达wnt基因的小鼠肝前体细胞上皮间质转化及迁移能力的变化，探讨wnt信号通路，在小鼠肝前体细胞上皮-间质转化中发生的作用。 方法 将表达wnt的腺病毒Ad-GFP-wnt3a,Ad-GFP-wnt3分别转入小鼠肝前体细胞中，，与空白对照组相比，观察其形态变化。细胞划痕实验和细胞迁移实验观察其对小鼠肝前体细胞迁移能力的影响。实时荧光定量Realtime-PCR和western-blot分别检测小鼠肝前体细胞中上皮标志物和间质标志物的表达改变。 结果 wnt3a诱导小鼠肝前体细胞发生上皮间质转化，提高其迁移能力 1.镜下观察，高表达wnt3a的小鼠肝前体细胞由不规则多边形变为长梭形。细胞划痕实验结果显示，Ad-wnt3a组细胞48h迁移距离为（0.53±0.05）mm，Ad-GFP组细胞48h迁移距离为（0.33±0.02）mm，与空白对照组比较，实验组细胞迁移距离增加，差异具有统计学意义(P0.05)。细胞迁移实验结果显示，Ad-GFP组24h穿过小孔的细胞为（10.33±2.08）个，而Ad-wnt3a组穿过的细胞为（62.00±3.60）个，相对空白对照组，其穿过小孔的细胞数量增加，差异具有统计学意义(P0.01)。 2.Realtime-PCR和Western-blot结果显示，Ad-wnt3a组细胞间质标志物N-cadherin、vimentin和snail的mRNA和蛋白水平表达均上调，而上皮标志物E-cadherin和CK18的mRNA水平和蛋白水平表达均下调,差异具统计学意义（P0.05）。 腺病毒Wnt3促进小鼠肝前体细胞发生上皮间质转化 1.显微镜下可见，14-19细胞为不规则多边形，而高表达wn3的14-19细胞的形状为长梭形。细胞划痕实验和细胞迁移实验结果均显示，高表达wnt3的14-19细胞迁移能力明显提高，与空载体转染细胞相比，差异具统计学意义（P＜0.001）。 2.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示，间质标记物N-cadherin、vimentin和twist1在mRNA和蛋白水平表达上调，相反上皮标记物E-cadherin在mRNA水平和蛋白水平表达下调，与空载体转染细胞相比，差异具统计学意义（P＜0.01）。 结论 1.成功构建高表达wnt基因的小鼠肝前体细胞株。 2.wnt3a能诱导小鼠肝前体细胞发生上皮间质转化，并增强其迁移能力。 3.wnt3能促进小鼠肝前体细胞发生上皮间质转化，并提高其迁移能力。 4.wnt信号调控小鼠肝前体细胞的EMT转化过程，提示其可能参与肝纤维化的过程。
【关键词】：wnt3a wnt3 肝前体细胞 上皮间质转化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-17
• 参考文献15-17
• 1 实验材料17-19
• 2 实验方法19-23
• 3 实验结果与结论23-30
• 4 讨论30-33
• 参考文献33-35
• 全文总结35-36
• 文献综述36-42
• 参考文献40-42
• 致谢42-43
• 攻读硕士学位期间发表的论文43-44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 胡代曦;张锡峰;芦永良;冯涛;黄佳yN;;Wnt3a诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化[J];第三军医大学学报;2013年20期

2 李旭;齐明华;;肝内细胞上皮-间质转化: 肝纤维化发生的新机制[J];世界华人消化杂志;2012年10期

3 李富贵;严律南;;肝干细胞的研究进展及应用前景[J];中国修复重建外科杂志;2007年02期

4 滕光菊,白雪帆,徐哲,黄长形,聂青和;大鼠原代培养肝细胞的生物学特性研究[J];中国现代医学杂志;2003年08期

  本文关键词：wnt3a,wnt3诱导小鼠肝前体细胞上皮间质转化及迁移的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：477463