DNA的G四链体抗体的制备和鉴定

发布时间：2017-06-24 14:05

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【摘要】：目的构建DNA的G四链体抗体的原核表达质粒,利用BL21(DE3)菌表达此抗体,并进行纯化及鉴定。方法化学合成DNA的G四链体抗体的基因BG4,插入以p ET-26b(+)为骨架构建的载体p SANG10中,构建DNA的G四链体抗体表达载体p SANG10-BG4。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌进行该抗体的自诱导表达,渗透压裂解法收集此抗体,并经His亲和层析纯化,用SDS-PAGE及Western blot法鉴定此抗体,并在SW480结肠癌细胞中验证此抗体功能。结果 DNA的G四链体抗体表达载体经双酶切及基因测序鉴定构建成功。该抗体相对分子质量(Mr)为30 000~37 000,以可溶性的形式表达于BL21菌细胞间质,表达产物与目的蛋白大小一致。结论成功制备了DNA的G四链体抗体。
【作者单位】： 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室;长治医学院生化教研室;长治医学院附属和济医院肾内科;
【关键词】： G四链体 原核表达载体 组氨酸标签
【分类号】：R392
【正文快照】： DNA的G四链体(G-quadruplex),简称G4是一种非经典的DNA二级结构,是由一些富含鸟嘌呤的序列构成。生物信息学分析表明该结构广泛存在于人类基因组中[1-3],DNA的G四链体结构在人类基因组中主要位于染色体末端及一些癌基因的启动子区域,如c-myc、c-kit、k-ras、vegf等[3-6],表明D

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本文编号：478396