丙型肝炎病毒NS3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

发布时间：2017-06-25 15:04

  本文关键词：丙型肝炎病毒NS3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：提高对丙型肝炎患者实验室检测的灵敏度和特异性,对相关人群进行筛查和早期诊断,是控制丙型肝炎病毒(HCV)流行与传播的有效措施。为了建立更为可靠的HCV诊断方法,通过采用PCR方法从J6/JFH12a型病毒中克隆出HCV ns3基因片段,将其连接到p ET-28a载体上,重组载体p ET-28a-ns3转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,以10%SDS-PAGE进行鉴定,获得表达的NS3重组蛋白分子量为72 k Da。将纯化的NS3蛋白免疫BALB/c小鼠,第4次免疫后采集血液并分离血清进行抗体活性鉴定,小鼠抗体效价为1∶256 000。进一步的Western blotting和间接免疫荧光结果显示,以重组NS3蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体可以很好地识别HCV感染Huh7.5.1细胞中的NS3蛋白,为下一步开展单克隆抗体制备和检测试剂盒研制工作奠定了基础。
【作者单位】： 昆明理工大学生命科学与技术学院;云南省分子医学研究中心;
【关键词】： 丙型肝炎病毒 B细胞表位 NS蛋白 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金(No.81260248) 国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B01) 云南省应用基础研究计划(No.KKS0201326002) 昆明理工大学人才培养基金(No.KKSY201326085) 云南省科技创新平台建设计划(No.2012DA002)资助~~
【分类号】：R373.21
【正文快照】： Received:September 13,2014;Accepted:December 10,2014Supported by:National Natural Science Foundation of China(No.81260248),National Science and Technology Surport Program ofChina(No.2014BAI01B01),Applied Basic Research Projects of Yunnan Province(No.KKS0

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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3 李喜芳;张文军;黄志文;张成成;罗桂飞;;M1GS-HCV/C_(141)核酶的构建及其体外抗病毒活性测定[J];生物工程学报;2013年12期

【共引文献】

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3 刘s

本文编号：482514