四种结核分枝杆菌特异蛋白抗原的克隆表达和血清学评价

发布时间：2017-06-29 08:23

  本文关键词：四种结核分枝杆菌特异蛋白抗原的克隆表达和血清学评价，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：我国长期采用细菌学结合临床症状的方法诊断结核病,它结合了痰涂片镜检、细菌培养、结核菌素皮肤试验(PPD皮试)和X线影像等检查的结果。但由于痰涂片阳性率低、细菌培养费时长,PPD皮试存在假阳性,以及X线影像检查特异性低,从而大大降低了对结核病诊断的效率。近些年一些新兴结核病实验室检测技术的应用,使结核病的检测更加快速灵敏。血清学检测技术就是其中的典范,这种技术具有操作简便、快速、稳定性好、无需特殊精密仪器、便于推广等优点,成为结核病诊断的良好辅助方法。然而,目前应用的结核抗原大多灵敏度很低,单一抗原在血清学检测时效果并不理想。本研究利用早期实验室建立的评价方法,在完善方法的同时,对四种结核分枝杆菌特异性蛋白抗原进行了克隆、表达和纯化。采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)和受试者工作特征曲线法(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC)建立出一套抗原诊断效能的评价体系。然后,对四种重组结核抗原的诊断效能进行分析,进而分析出不同抗原组合的诊断性能,并以实验结果对评价方法进行佐证,最终评价得出最佳的抗原组合方式。 研究通过文献检索、抗原表位分析等方法,筛选出CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX四种蛋白进行了克隆表达。成功纯化出重组蛋白CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX后,应用ELISA方法对其诊断价值进行了评价。测得这儿种蛋白的最佳包被浓度分别为2.79μg/ml、5.45μg/ml、9.00μg/ml和7.60μg/ml,最佳血清稀释度除Ag85B为1：400外,其余均为1：200。对CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX四种结核抗原及其不同组合的ELISA检测的评价结果显示,单一抗原中38kDa的诊断性能最佳,灵敏度为55.9%,特异度为87.8%,Youden指数为0.437；其余三种抗原的灵敏度从40.9%至47.9%不等,Youden指数均低于38kDa；抗原组合的诊断效能高于单种抗原,诊断效果最好的组合为38kDa+CFP10-ESAT6+HspX,灵敏度为75.3%,特异度为68.9%,Youden指数为0.442,实验结果证实其为最佳的抗原组合。 本研究成功对CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B和HspX几种抗原进行了克隆、表达、纯化和检测性能评价,对之前的研究结果做出了进一步数据补充,对今后的血清学诊断方法提出了合理的抗原组合建议。
【关键词】：结核病 结核分枝杆菌 诊断效能评价 酶联免疫吸附试验 受试者工作特征曲线
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378;R392
【目录】：

• Abbreviation6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 总体实验技术路线14-15
• 第一部分 抗原的克隆表达、纯化及鉴定15-43
• 材料和方法15-26
• 结果26-41
• 讨论41-43
• 第二部分 抗原的血清学验证43-57
• 材料和方法43-46
• 结果46-52
• 讨论52-57
• 结论57-58
• 参考文献58-60
• 综述60-67
• 参考文献65-67
• 致谢67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 白广红;李耀军;焦向阳;;胶体金法快速检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的研究[J];国际检验医学杂志;2013年10期

2 袁红娟;;T细胞斑点试验在肺外结核病诊断方面的应用[J];滨州医学院学报;2014年01期

3 郑玉群;许卫国;陆伟;焦永军;肖占沛;;免疫磁珠分离涂片和PCR检测痰内结核分枝杆菌的诊断价值研究[J];江苏预防医学;2010年02期

4 黄胜;余继英;成波;周丹;雷治国;陈林;邹宇洁;;两种免疫学检验方法对于结核病的临床价值比较[J];临床肺科杂志;2013年11期

5 董恩军;张灵霞;张翠英;;结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B蛋白在结核病诊断的价值[J];中国热带医学;2011年03期

6 李浩;徐俊杰;陈薇;;结核分枝杆菌RD-1区编码蛋白的结构和功能[J];生物化学与生物物理进展;2009年10期

7 李峤珂;吴雪琼;阳幼荣;张俊仙;梁建琴;王安生;张广宇;张涛;王兰;;T SPOT-TB试剂盒在结核病临床诊断中的应用价值[J];实用医学杂志;2010年17期

8 王艳芬;;三种结核分枝杆菌检测方法的比较[J];生物技术世界;2013年03期

9 古甫丁;地力下提·阿不力孜;马良;;结核感染T细胞斑点试验在骨与关节结核诊断中的应用研究[J];临床和实验医学杂志;2013年24期

10 黄良荣;;PPD皮试在学生体检中的应用[J];求医问药(下半月);2012年11期

  本文关键词：四种结核分枝杆菌特异蛋白抗原的克隆表达和血清学评价，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：497218