丙型肝炎病毒核心蛋白核酸适体抗病毒作用机制

发布时间：2017-07-01 05:08

  本文关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白核酸适体抗病毒作用机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：丙型肝炎病毒（HCV）是引起严重慢性肝脏疾病的主要病原体，世界上约有1.8亿的感染者。由于HCV的抗体产生周期长、HCV RNA含量低等使得通过检测抗-HCV及实时荧光定量PCR检测HCV RNA的方法存在严重的局限性。此外，HCV基因型具有高度变异性和突变性，使得目前的治疗效果很不理想。加之，缺乏有效的丙肝疫苗，所以开发出一种新型检测和治疗HCV的方法在全世界范围内刻不容缓。HCV感染性病毒颗粒产生模式是核心蛋白在脂滴表面富积，参与病毒颗粒在脂滴表面或附近的组装,然后在内质网内获得包膜，进一步分泌出体外。 核酸适体被称为化学抗体，与抗体相比，核酸适体因其分子小、易合成和易修改而具有显著性优势。研究发现，运用SELEX技术筛选出的针对HCV核心蛋白的核酸适体在开发药物方面具有广阔的前景。本文将HCV核心蛋白分段克隆到原核/真核表达载体，并对core分段蛋白进行了原核表达及纯化。我们的研究结果显示：core蛋白核酸适体不仅能够特异性识别原核表达的重组core蛋白，，还能检测出HCV病人血清中的core蛋白。研究还发现core核酸适体不影响HCV RNA的复制及病毒的释放，但抑制感染性病毒颗粒的产生。在核酸适体处理的HCV感染系统中，核酸适体没有诱导干扰素及干扰素刺激因子（ISGs）的产生，细胞外ELONA实验证实了核酸适体能够与HCV core蛋白D1和D2相互作用，在细胞内转入真核重组质粒D1及D1-D2后发现病毒的感染效果有了明显的逆转，这些结果表明抗病毒作用的产生是因为核酸适体影响了core蛋白的D1与D2区的生理学功能所致。进一步实验数据显示，这些核酸适体破坏了core蛋白与脂滴表面的共定位，影响了core蛋白与NS5A蛋白的相互作用，扰乱了core蛋白与病毒基因组RNA的结合。 综上所述，core核酸适体是通过影响core蛋白的生理学功能来影响HCV病毒的组装，进而达到抑制感染性病毒产生的目的。总之，我们为研究core蛋白在病毒生活周期中的作用提供了新的实验工具，为开发早期的HCV诊断试剂及开发新一代抗病毒药物提供参考。
【关键词】：丙型肝炎病毒 核心蛋白 核酸适体 病毒组装 ELONA
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.21
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 目录8-11
• 第1章 绪论11-19
• 1.1 慢性丙型肝炎11-14
• 1.1.1 丙型肝炎病毒的发现及流行病学11-12
• 1.1.2 丙型肝炎病毒蛋白的基因结构和功能12-13
• 1.1.3 丙型肝炎病毒生活周期13-14
• 1.2 丙型肝炎核心蛋白简介14-15
• 1.2.1 丙型肝炎核心蛋白（core）的结构与功能14-15
• 1.2.2 丙型肝炎核心蛋白介导的病毒颗粒组装15
• 1.3 核酸适体及其药物的临床研究15-17
• 1.3.1 核酸适体功能简介15-16
• 1.3.2 核酸适体药物在临床的研究16-17
• 1.4 课题的研究意义及设计思路17-19
• 第2章 HCV 核心分段蛋白的表达及纯化19-42
• 2.1 前言19
• 2.2 实验材料、仪器设备及溶液配制19-24
• 2.2.1 实验材料19-20
• 2.2.2 实验仪器设备20-21
• 2.2.3 溶液配制21-24
• 2.3 实验方法24-35
• 2.3.1 原核/真核重组质粒的构建及鉴定24-31
• 2.3.2 原核重组质粒 HCV 分段蛋白的小量表达31-33
• 2.3.3 原核 HCV core 分段蛋白的大量表达及纯化33-35
• 2.4 实验结果与讨论35-41
• 2.4.1 原核/真核重组质粒的构建及鉴定35-38
• 2.4.2 分段蛋白的原核小量表达及鉴定38
• 2.4.3 分段蛋白的原核大量表达及纯化38-40
• 2.4.4 讨论40-41
• 2.5 本章小结41-42
• 第3章 检测 Core 核酸适体与核心蛋白的结合区42-48
• 3.1 前言42
• 3.2 实验材料及仪器42-43
• 3.2.1 实验材料42
• 3.2.2 实验仪器42-43
• 3.3 实验方法43
• 3.4 实验结果与讨论43-47
• 3.4.1 丙型肝炎病毒核心蛋白核酸适体识别 core 蛋白的亲和力鉴定43-45
• 3.4.2 丙型肝炎病毒核心蛋白核酸适体与 core 蛋白的结合区鉴定45-46
• 3.4.3 病人血清中核心蛋白含量与 HCV 病毒滴度的关系46-47
• 3.4.4 讨论47
• 3.5 本章小结47-48
• 第4章 HCV Core 核酸适体对病毒生活周期的影响48-57
• 4.1 前言48
• 4.2 实验材料、仪器48-49
• 4.2.1 实验材料48-49
• 4.2.2 实验仪器49
• 4.3 实验方法49-53
• 4.4 实验结果与讨论53-56
• 4.4.1 HCV core 核酸适体对丙型肝炎病毒感染的抑制作用53-55
• 4.4.2 HCV core 核酸适体不诱导 HCV 感染细胞先天性免疫应答55
• 4.4.3 讨论55-56
• 4.5 本章小结56-57
• 第5章 HCV Core 核酸适体抗病毒作用机制57-63
• 5.1 前言57
• 5.2 实验材料、仪器57-58
• 5.2.1 实验材料57-58
• 5.2.2 实验仪器58
• 5.3 实验方法58-59
• 5.4 实验结果与讨论59-62
• 5.4.1 core 蛋白 D1 和 D2 区对病毒感染的影响59-60
• 5.4.2 核心蛋白核酸适体对病毒组装的影响60-62
• 5.4.3 讨论62
• 5.5 本章小结62-63
• 结论与展望63-64
• 参考文献64-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 唐霓;;丙型肝炎病毒编码蛋白的生物学功能[J];世界华人消化杂志;2009年28期

  本文关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白核酸适体抗病毒作用机制，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：504654