短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建

发布时间：2017-07-01 19:15

  本文关键词：短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:构建针对NLRP3基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,在Hep G2细胞中鉴定该载体对NLRP3的抑制效果。方法:设计针对NLRP3基因的sh RNA序列,将其插入慢病毒表达载体p WPT-U6-sh RNA-CMV-GFP中,将载体与包装质粒ps PAX2、p MD2.G共转染293T细胞,进行病毒包装;得到的病毒原液浓缩后系列稀释为9个浓度递减的病毒液,分别转染293T细胞后进行滴度测定;用获得的慢病毒液感染人肝癌细胞系Hep G2,获得稳定沉默NLRP3的细胞株;利用实时定量PCR和Western印迹检测稳定细胞株中NLRP3的沉默效应。结果:构建了具有沉默效应的慢病毒干扰载体;稀释法测定干扰病毒滴度为2×108TU/m L;实时定量PCR和Western印迹实验均证实慢病毒转染后,细胞株中NLRP3表达水平明显降低。结论:构建了人NLRP3基因特异性慢病毒干扰载体,获得NLRP3基因稳定干扰的Hep G2细胞株。
【作者单位】： 解放军总医院内分泌科;解放军总医院基础医学所分子生物室;
【关键词】： NLRP 短发卡RNA 慢病毒载体 Hep G细胞
【基金】：国家高技术研究发展计划(2013AA020105)
【分类号】：R373;Q78
【正文快照】： NLRP3炎症小体是新近发现的一种胞内模式识别受体复合物,是核苷酸结合寡聚域样受体家族[nucleotide-binding oligomerization domain(NOD)-like receptors,NLR]的模式识别受体。作为NLR家族中最明确的一个炎症小体,其由NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶caspase-1和调节蛋

【共引文献】

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