过氧化氢诱导小鼠巨噬细胞表达细胞因子和趋化因子的研究

发布时间：2017-07-02 13:14

  本文关键词：过氧化氢诱导小鼠巨噬细胞表达细胞因子和趋化因子的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：活性氧（Reactive oxygen species, ROS）是需氧生物利用氧气的代谢过程中产生的一类性质活泼的原子或者分子，主要产生部位为线粒体，具有较强的氧化能力。主要包括超氧阴离子(O_2-)、羟自由基(·OH)、过氧化氢(H_2O_2)、单线态氧(1O_2)等。长期以来，ROS被认为是损伤细胞的一类毒性物质。但是近十年来的研究发现，短暂波动的生理水平的ROS在有关细胞增殖、分化、凋亡、促炎抗炎等的信号转导中有着重要的角色，参与了细胞的基本生理活动，被称为第二信使。H_2O_2是ROS的主要成分，不带电荷且比较稳定，可自由扩散进入细胞。据报道，H_2O_2可在体内和体外诱导产生细胞因子和趋化因子。 巨噬细胞是免疫细胞的重要成员之一，由血液中的单核细胞进入结缔组织或器官发育成熟而来。巨噬细胞在机体免疫中有着重要角色，不仅可以识别清除病原体等抗原性异物、提呈抗原启动免疫应答、抗肿瘤，还可以促进炎症反应。活化后的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子和白三烯、补体成分等炎症介质来参与促进炎症反应；分泌MCP-1、MIP-2、IL-8等趋化因子，招募活化更多的中性粒细胞、淋巴细胞等免疫细胞，，发挥免疫作用。 本课题以研究低剂量外源性H_2O_2对巨噬细胞表达细胞因子TNF-α、IL-1β和趋化因子MCP-1、MIP-2的影响为目的，选取小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象，MTT法确定外源性H_2O_2对于RAW264.7的最适生理浓度范围及作用时间后，以过氧化氢酶（Catalase, CAT）预处理30min为对照，分别用不同浓度的H_2O_2处理RAW264.7细胞24h，收集细胞提取总RNA，采用Real-time PCR法检测细胞因子TNF-α、IL-1β和趋化因子MCP-1、MIP-2mRNA表达的变化；同时收集培养细胞上清，采用ELISA法检测细胞因子TNF-α、IL-1β和趋化因子MCP-1、MIP-2蛋白表达的变化。结果显示，10、20、40μmol/L浓度的H_2O_2均能诱导RAW264.7细胞因子TNF-α、IL-1β和趋化因子MCP-1、MIP-2的表达，且存在剂量依赖性，呈现出随着H_2O_2浓度的增大作用增强的趋势；而单独用200U/mL CAT处理小鼠巨噬细胞RAW264.7，基本不影响其细胞因子TNF-α、IL-1β和趋化因子MCP-1、MIP-2的表达；CAT能够抑制低剂量H_2O_2对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞因子TNF-α、IL-1β和趋化因子MCP-1、MIP-2表达量的诱导作用。
【关键词】：过氧化氢 过氧化氢酶 小鼠巨噬细胞 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-1β 单核细胞趋化蛋白-1 巨噬细胞炎性蛋白-2
【学位授予单位】：河南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363;Q25
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 目录8-11
• 缩略词表11-12
• 文献综述12-24
• 1 活性氧12-16
• 1.1 活性氧的来源及调控12-13
• 1.2 活性氧：从毒性分子到信号分子13
• 1.3 活性氧对细胞生理的调控13-14
• 1.4 与活性氧有关的信号通路14-15
• 1.5 活性氧信号与创伤修复15-16
• 2 巨噬细胞16-19
• 2.1 巨噬细胞概述16-17
• 2.2 巨噬细胞的生物学功能17-19
• 3 致炎因子和趋化因子19-24
• 第一章 引言24-26
• 第二章 材料和方法26-42
• 2.1 实验材料26-30
• 2.1.1 实验细胞26
• 2.1.2 主要试剂26-27
• 2.1.3 主要仪器设备27-28
• 2.1.4 试剂的配置28-30
• 2.2 RAW264.7 细胞的培养30-32
• 2.2.1 细胞培养的准备工作30-31
• 2.2.2 实验步骤31-32
• 2.3 MTT 法确定外源性 H_2O_2促进巨噬细胞增殖的最适生理浓度范围及时间32-33
• 2.3.1 基本原理32
• 2.3.2 实验步骤32-33
• 2.4 实验分组及药物处理33
• 2.4.1 实验分组33
• 2.4.2 药物处理33
• 2.5 取材33-34
• 2.6 实时荧光定量（RT-PCR）34-39
• 2.6.1 总 RNA 提取34-35
• 2.6.2 cDNA 第一链合成（逆转录反应）35-36
• 2.6.3 RT-PCR36-39
• 2.7 ELISA 检测39-42
• 2.7.1 基本原理39
• 2.7.2 实验设计39
• 2.7.3 样品处理39-40
• 2.7.4 RAW264.7 细胞上清中 TNF-α、IL-1β、MCP-1、MIP-2 浓度的测定40-42
• 第三章 结果42-54
• 3.1 MTT 实验结果42-43
• 3.2 RNA 质量检测43-44
• 3.3 cDNA 可用性检测结果44
• 3.4 RT-PCR 实验结果44-50
• 3.4.1 RT-PCR 质量检测结果44-46
• 3.4.2 CAT 对 H_2O_2诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞因子基因表达的影响46-48
• 3.4.3 CAT 对 H_2O_2诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 趋化因子基因表达的影响48-50
• 3.5 ELISA 实验结果50-54
• 3.5.1 CAT 对 H_2O_2诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞因子蛋白生成的影响50-52
• 3.5.2 CAT 对 H_2O_2诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 趋化因子蛋白生成的影响52-54
• 第四章 讨论54-58
• 4.1 MTT 实验结果分析54-55
• 4.2 CAT 对 H_2O_2诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞因子基因表达与生成的影响55-56
• 4.3 CAT 对 H_2O_2诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 趋化因子基因表达与生成的影响56-58
• 第五章 结论58-60
• 参考文献60-66
• 致谢66-68
• 攻读学位期间发表的学术论文目录68-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 邱坤良,观志强,徐锡金,霍霞;巨噬细胞与创伤修复[J];创伤外科杂志;2005年02期

2 李建喜;杨志强;王学智;;活性氧自由基在动物机体内的生物学作用[J];动物医学进展;2006年10期

3 李卫;刘佳;白家媛;谷长勤;张万坡;程国富;胡薛英;;α肿瘤坏死因子的研究进展[J];动物医学进展;2010年12期

4 李学锋,王慧君;巨噬细胞在损伤时间推断中的作用[J];法医学杂志;2003年02期

5 涂永生;严鹏科;朱炳阳;黄红林;廖端芳;;普罗布考抑制大鼠血管平滑肌细胞周期素D1蛋白表达和G1→S转换[J];中国动脉硬化杂志;2005年06期

6 盛林;马承恩;郝琳;岳欣;潘其兴;;普罗布考抑制过氧化氢刺激大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的机制[J];中国动脉硬化杂志;2007年09期

7 李文军,李二红,杨宗城;巨噬细胞在炎症消散中的作用[J];免疫学杂志;2000年S1期

8 吴凤霞;袁国华;;趋化因子及其受体研究进展[J];川北医学院学报;2008年03期

9 刘春英;张勇;高玲;牟其芸;孙晓红;周传凤;;活性氧的信号转导功能[J];食品与药品;2007年02期

10 赵云罡,徐建兴;线粒体,活性氧和细胞凋亡[J];生物化学与生物物理进展;2001年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 霍亚楠;活性氧自由基参与介导表皮生长因子刺激的角膜上皮细胞生长和创伤修复的研究[D];浙江大学;2009年

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本文编号：510058