Kiss-1受体Gpr54对T细胞发育的调节作用及其对免疫功能的影响

发布时间：2017-07-03 03:15

  本文关键词：Kiss-1受体Gpr54对T细胞发育的调节作用及其对免疫功能的影响

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【摘要】：Gpr54及其配体Kiss1在机体中行使多种功能,已经被报道参与调控癌症、激素、能量代谢等。Gpr54/Kiss1在正常生理情况下能调节哺乳动物中促性腺激素释放激素(GnRH)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)等的分泌,促进青春期的正常启动。众所周知,胸腺发育与激素和青春期发育相关,所以我们对Gpr54是否参与调节胸腺的发育进行研究。本课题主要利用Gpr54基因敲除小鼠,研究Gpr54/Kiss1信号对胸腺T细胞发育的影响,尤其是研究Gpr54/Kiss1信号是否能直接调控T细胞的分化成熟。我们发现,Gpr54基因敲除小鼠的胸腺明显增大,其组织结构异于野生型小鼠,皮质变薄。另外在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,GPR54基因敲除小鼠表现出更加严重的临床病症,说明对自身免疫性疾病的易感性增加。为尽量降低性激素的影响,探讨Gpr54对T细胞发育不依赖于经典激素的调控作用,我们进一步以青春期前小鼠及去势小鼠为研究对象进行实验。青春期前的Gpr54基因敲除小鼠的胸腺没有显示有显著性增大,但胸腺细胞发育也受到了影响。通过对胸腺细胞进行流式细胞分析,发现从CD4-CD8-双阴性到CD4+或CD8+单阳性阶段都出现了明显的异常。另外发现Gpr54基因敲除小鼠的Treg细胞比例显著下降,这种功能性T细胞的比例改变显然影响到了小鼠的免疫功能。在去势小鼠的EAE实验中Gpr54基因敲除小鼠表现出更加严重的临床病症。另外,在研究T细胞的体外增殖与分化时,还发现Gpr54缺陷会影响T细胞在多种情况下的增殖能力,同时Gpr54基因敲除小鼠的Thl细胞比例升高,向此方向分化的趋势明显。综上所述,Gpr54对胸腺T细胞发育成熟有直接调控作用,并能影响T细胞亚群的平衡。Gpr54缺陷加重EAE模型小鼠病症,且使T细胞增殖能力受损。
【关键词】：Gpr54 T细胞发育 Treg细胞 EAE 细胞增殖
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 引言12-20
• 1.1 胸腺与T细胞发育12
• 1.2 胸腺发育相关的基因12-16
• 1.3 CD_4~+T淋巴细胞亚群与自身免疫性疾病16-18
• 1.4 Gpr54/Kiss1简介18-20
• 第二章 材料与方法20-42
• 2.1 实验动物20
• 2.2 主要试剂与试剂盒20-22
• 2.3 实验仪器22-23
• 2.4 实验耗材23
• 2.5 常用试剂配制23-24
• 2.6 小鼠基因型鉴定24-26
• 2.7 EAE模型的建立与临床评分26-28
• 2.8 小鼠的去势手术28-29
• 2.9 CD4+细胞的分离纯化29-30
• 2.10 组织化学染色30-33
• 2.11 细胞的流式分析33-34
• 2.12 细胞因子mRNA检测34-39
• 2.13 T细胞的体外分化实验39-40
• 2.14 淋巴细胞的体外增殖实验40-41
• 2.15 数据统计分析41-42
• 第三章 实验结果42-60
• 3.1 Gpr54敲除小鼠的胸腺发育及免疫状况发生显著变化42-45
• 3.1.1 Gpr54对胸腺大小的影响42-43
• 3.1.2 Gpr54对胸腺细胞数量的影响43-44
• 3.1.3 Gpr54敲除小鼠的胸腺皮质明显变薄44
• 3.1.4 Gpr54对EAE发病状况的影响44-45
• 3.2 GPR54在胸腺上的表达情况45-48
• 3.2.1 Gpr54在胸腺及纯化的T细胞上有明显的表达45-46
• 3.2.2 Gpr54在胸腺上皮细胞与淋巴细胞上的表达46-48
• 3.3 Gpr54对青春期前小鼠淋巴器官及T细胞发育的影响48-52
• 3.3.1 Gpr54对青春期前小鼠淋巴器官的影响48-49
• 3.3.2 Gpr54缺失导致淋巴细胞增殖缺陷49-50
• 3.3.3 Gpr54对免疫器官淋巴细胞的亚群构成的影响50-51
• 3.3.4 Gpr54对Treg细胞比例的影响51-52
• 3.4 Gpr54敲除小鼠EAE的发病症状及炎性细胞因子的表达52-55
• 3.4.1 去势后Gpr54对小鼠EAE发病状况的影响52-53
• 3.4.2 Gpr54对EAE小鼠Treg细胞比例的影响53-54
• 3.4.3 EAE小鼠炎性细胞因子的表达差异54-55
• 3.5 去势后Gpr54对小鼠淋巴器官及T细胞增殖的影响55-57
• 3.5.1 Gpr54影响EAE小鼠脾脏细胞数量55-56
• 3.5.2 Gpr54缺失导致淋巴细胞特异性增殖缺陷56-57
• 3.6 Gpr54在T细胞分化中的影响57-58
• 3.7 Gpr54可能调节的T细胞发育相关基因的初步筛查58-60
• 第四章 讨论60-64
• 4.1 Gpr54对T细胞发育有直接影响60-61
• 4.2 Gpr54的调控机理浅析61-62
• 4.3 Gpr54缺失对EAE疾病模型的影响62-64
• 第五章 全文总结64-66
• 参考文献66-73
• 附录1 英文缩写对照表73-75
• 附录2 学术论文及科研项目75-76
• 致谢76-77

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1 杜占文,张昕,张俊武;一个可能与T细胞发育相关的新的C2H2型锌指蛋白基因的克隆(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2004年07期

2 ;[J];;年期

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1 刘方;Kiss-1受体Gpr54对T细胞发育的调节作用及其对免疫功能的影响[D];华东师范大学;2014年

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本文编号：512213