rAAV8-1.3HBV介导的HBV慢性感染—小鼠药物评价模型的建立
发布时间:2017-07-03 10:19
本文关键词:rAAV8-1.3HBV介导的HBV慢性感染—小鼠药物评价模型的建立
更多相关文章: 乙型肝炎病毒 rAAV8-1.3HBV 小鼠模型 药物评价
【摘要】:目的 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV),是引起人类急慢性肝炎的主要病原体之一。全球约1/3的人曾感染HBV,我国属于HBV感染的高流行区,乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性率接近10%。目前,对HBV的研究主要以应用HBV相关的动物模型为主,又以小鼠模型应用最为广泛。现阶段常用于HBV研究的小鼠模型包括:转基因小鼠模型和水动力质粒法构建的HBV小鼠模型。但这两种模型均因各自存在缺陷,使得应用受到限制。 2010年本课题组制备出携带1.3拷贝HBV基因组(ayw亚型)的重组8型腺相关病毒(rAAV8-1.3HBV),尾静脉注射C57BL/6小鼠后,初步检测到病毒在小鼠体内持续成功表达。为进一步评价该方法制备小鼠模型的成模情况,探索该模型是否可作为新的抗HBV药物筛选和评价的动物模型,故进行此实验。 方法 1.模型的建立及评价 选取4到6周龄雄性C57BL/6小鼠30只,按照1×1011vg剂量,尾静脉注射rAAV8-1.3HBV病毒至30只小鼠体内。病毒注射后第2周、第4周定性检测血清学HBeAg、HBsAg的表达情况,第6周定量检测血清学HBV DNA、HBeAg、HBsAg的表达情况。结合血清学定量、定性检测结果,在30只小鼠中选取建模成功的小鼠用于后续实验。 2.药物实验的分组及给药策略 将建模成功的rAAV8-1.3HBV介导的慢性感染小鼠随机分为恩替卡韦高、低剂量组,拉米夫定高、低剂量组,生理盐水组及空白对照组,采用灌胃给药的方式,给药10天后停药15天。 3.药效的评价指标 实验过程中给药5天、给药10天、停药15天三个时间点分别定量检测小鼠血清学HBV DNA、HBeAg、HBsAg的表达水平。对比给药前后、停药前后小鼠血清学HBV DNA、HBeAg、HBsAg的变化情况,采用统计学分析,最终得出结论。 4.各指标检测方法 血清学HBV DNA的表达情况采用荧光定量PCR方法检测,HBeAg和HBsAg的表达情况采用定性、定量ELISA方法检测。 结果 1.小鼠成模情况评价 1.1ELISA定性检测结果病毒注射第14天检测小鼠血清学HBeAg和HBsAg表达水平显示,30只小鼠中28只HBeAg表达为阳性,HBsAg全部表达为阳性;第28天检测结果显示,29只建模小鼠HBeAg表达阳性,HBsAg全部表达为阳性。 1.2HBV DNA定量检测结果病毒注射第42天检测小鼠血清学HBV DNA(lg (IU/mL))的表达情况显示,,30只小鼠中27只HBV DNA表达大于5.0。 1.3ELISA定量检测结果病毒注射第42天检测小鼠血清学HBeAg和HBsAg表达水平显示,除3只小鼠HBeAg、HBsAg表达相对较低,其余27只小鼠血清HBeAg平均值13.22±1.78S/CO,HBsAg平均值93.24±7.24mIU/mL。 结合HBV DNA表达水平及ELISA定性、定量结果,最终选取27只小鼠作为后续模型使用,建模成功率达90%。 2.药物处理对小鼠模型血清HBV DNA表达的影响 对模型小鼠应用核苷酸类似物后观察到,恩替卡韦低剂量组给药10天后血清学HBV DNA表达水平下降明显,与同一天生理盐水组对比差异存在统计学意义(P<0.05),停药15天后明显回复,与该组给药10天时对比差异存在统计学意义(P<0.05)。恩替卡韦高剂量组,给药5天后血清学HBV DNA表达水平随即出现明显下降,与同一天生理盐水组对比差异存在统计学意义(P<0.01)。给药10天后下降仍然明显,与同一天生理盐水组对比差异存在统计学意义(P<0.01)。 拉米夫定低剂量组给药10天后血清学HBV DNA下降明显,与同一天生理盐水组对比差异存在统计学意义(P<0.05),停药15天后出现明显回复,与该组给药10天时对比差异存在统计学意义(P<0.05)。拉米夫定高剂量组给药10天后下降明显,与同一天生理盐水组对比差异存在统计学意义(P<0.05)。 3.药物处理对小鼠血清HBeAg、HBsAg表达的影响 实验全程第0天、给药10天、停药15天对各组小鼠血清学HBeAg、HBsAg表达水平检测,恩替卡韦高、低剂量组,拉米夫定高、低剂量组,空白对照组、生理盐水组均无明显变化,差异无统计学意义。 结论 对免疫力正常的C57BL/6小鼠注射rAAV8-1.3HBV病毒后,小鼠体内高水平表达HBV DNA、HBsAg、HBeAg,利用rAAV8-1.3HBV病毒可成功制备rAAV8-1.3HBV介导的HBV慢性感染小鼠模型,模型具有制备简单、成模率高、表达稳定均一的特点。对该模型应用核苷酸类似物后,小鼠血清HBVDNA表达水平显著下降,而HBeAg、HBsAg表达水平未见明显改变。rAAV8-1.3HBV介导的慢性感染小鼠模型,客观真实地反应了现有核苷酸类似物的抗HBV效果,可以作为新的抗HBV核苷酸类似物药物筛选评价模型应用。
【关键词】:乙型肝炎病毒 rAAV8-1.3HBV 小鼠模型 药物评价
【学位授予单位】:济南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R-332;R373.21
【目录】:
- 摘要8-11
- Abstract11-15
- 主要符号表15-16
- 前言16-19
- 材料和方法19-30
- 1 实验材料19-21
- 1.1 重组腺相关病毒19
- 1.2 实验小鼠19
- 1.3 药物19
- 1.4 主要试剂19-20
- 1.5 主要仪器20-21
- 1.6 主要试剂的配制21
- 2 实验方法及步骤21-27
- 2.1 重组病毒 rAAV8-1.3HBV 的制备21-22
- 2.2 荧光定量 PCR 检测血清学 HBV DNA 表达水平步骤22-24
- 2.3 HBeAg 定性检测方法24-26
- 2.4 HBsAg 定性检测方法26-27
- 2.5 HBeAg 定量检测方法27
- 2.6 HBsAg 定量检测方法27
- 3 动物处理及分组27-29
- 3.1 动物模型的建立27-28
- 3.2 动物模型的筛选28
- 3.3 动物分组及处理情况28-29
- 4 统计学方法29-30
- 结果30-39
- 1 小鼠成模情况30-33
- 1.1 血清学 HBeAg 和 HBsAg 定性检测结果30
- 1.2 血清学 HBV DNA 的表达情况30-31
- 1.3 血清学 HBeAg 和 HBsAg 定量检测结果31-33
- 2 药物处理对小鼠模型血清学 HBV DNA 表达水平的影响33-36
- 2.1 ETV 对小鼠模型血清学 HBV DNA 表达水平的影响33-34
- 2.2 LAM 对小鼠模型血清学 HBV DNA 表达水平的影响34-36
- 3 药物处理对小鼠模型血清学 HBeAg、HBsAg 表达水平的影响36-39
- 讨论39-45
- 一、评价小鼠模型的成模情况41
- 二、核苷类似物对小鼠模型血清 HBV DNA 表达的影响41-42
- 三、核苷类似物对小鼠模型血清 HBeAg、HBsAg 表达的影响42-45
- 结论45-46
- 参考文献46-50
- 附图50-53
- 综述53-61
- 参考文献59-61
- 攻读学位期间取得的研究成果61-62
- 一.攻读硕士学位期间参与的科研工作61
- 二.攻读硕士学位期间已发论文61-62
- 致谢62
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 郭燕菊;王文;孙世惠;曾道炳;赵光宇;于虹;郭彦;谭文杰;卢实春;周育森;;免疫抑制剂地塞米松可明显延长乙型肝炎病毒抗原在水动力法转染HBV小鼠模型中的表达[J];病毒学报;2010年01期
2 董小岩;尉迟捷;王刚;田文洪;陆月;张风卫;王文;王岳;谭文杰;吴小兵;;高嗜肝性8型重组腺相关病毒体内转导法制备乙型肝炎病毒持续感染小鼠模型[J];病毒学报;2010年06期
3 李平;于益芝;;乙型肝炎病毒感染的小鼠模型[J];国际流行病学传染病学杂志;2006年06期
4 闫兆平;张琳;;核苷类似物治疗慢性乙型肝炎研究进展[J];国际消化病杂志;2009年02期
5 熊一力,刘光泽,贾彦征;HBV转基因小鼠免疫耐受机制的实验研究[J];世界华人消化杂志;2002年06期
6 赵鸿;斯崇文;;中国乙型病毒性肝炎的流行现状[J];中国医学前沿杂志(电子版);2008年02期
7 庄辉;;乙型肝炎流行病学研究进展[J];中国医学前沿杂志(电子版);2009年02期
本文关键词:rAAV8-1.3HBV介导的HBV慢性感染—小鼠药物评价模型的建立
更多相关文章: 乙型肝炎病毒 rAAV8-1.3HBV 小鼠模型 药物评价
本文编号:513289
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shiyanyixue/513289.html
最近更新
教材专著