aFGF诱导大鼠BMSCs分化为NSCs的实验研究
发布时间:2017-07-05 14:20
本文关键词:aFGF诱导大鼠BMSCs分化为NSCs的实验研究
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【摘要】:第一部分大鼠BMSCs的体外培养、纯化和鉴定 目的:体外培养并纯化大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs);研究其生物学特性;检测细胞表面标志物以鉴定细胞。 方法:采用全骨髓贴壁培养法对大鼠BMSCs进行培养,并通过传代培养进行纯化细胞。在倒置相差显微镜下观察细胞的形态特征;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法以绘制细胞的生长曲线;用流式细胞仪(FCM)测定第3代BMSCs的细胞周期,并鉴定细胞表面标志物。 结果:培养的细胞呈贴壁生长,表现为长梭形、多角形。第1、3、5代细胞的生长曲线均呈S形,活性无明显差异。细胞周期显示94.34%细胞处于G0/G1期,有较强的分裂增殖能力。FCM检测CD29、CD54、CD90表达阳性,CD45表达阴性。 结论:全骨髓贴壁培养法能培养出高纯度的大鼠BMSCs。细胞生长稳定、增殖快、可多次传代,具有干细胞特性。 第二部分aFGF诱导大鼠BMSCs分化为NSCs并鉴定NSCs 目的:研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经干细胞(NSCs)的可行性,最佳作用剂量和最佳诱导时间,并鉴定分化前后的细胞。 方法:全骨髓贴壁培养法培养大鼠BMSCs。实验组(aFGF诱导组-A组)分别用10、20、40、60、80、100、120ng/ml aFGF进行诱导分化,阳性对照组(bFGF诱导组-B组)用20ng/ml bFGF诱导分化,阴性对照组(N组)不加任何诱导剂。在倒置相差显微镜下观察细胞诱导前后的形态特征变化。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的基因表达。免疫荧光染色法检测Nestin、NSE的蛋白表达。 结果:RT-PCR结果显示Nestin、NSE mRNA在不同组均有表达,aFGF的最佳作用剂量为80ng/ml。以80ng/ml的aFGF进行后续诱导分化实验,RT-PCR结果显示以诱导6h后A组中Nestin mRNA表达最强,与其余各组比较(P0.05),差异有统计学意义;随着诱导时间的延长,Nestin mRNA表达呈逐渐减弱趋势。在诱导6d后各组比较,,A组中NSE mRNA表达最强,差异有统计学意义(P0.05)。诱导6h后可见少数细胞的胞体收缩成椭圆形并伸出细长突起,免疫荧光染色显示Nestin蛋白表达阳性;诱导6d后绝大部分细胞突起呈两极或多极形状,并交织成网状,免疫荧光染色显示NSE蛋白表达阳性。 结论:aFGF能在体外诱导大鼠BMSCs分化为NSCs,是一种有效的生物诱导剂,其最佳作用剂量为80ng/ml。诱导分化而成的细胞可以再度分化为神经元样细胞,从而在功能上鉴定了NSCs。BMSCs经aFGF诱导6h后细胞具有NSCs特性,说明6h为aFGF的最佳诱导时间。
【关键词】:全骨髓贴壁培养法 骨髓间充质干细胞 细胞表面标志物 大鼠 aFGF NSCs 诱导 分化
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R329.2
【目录】:
- 英汉缩略语名词对照5-6
- 摘要6-9
- ABSTRACT9-13
- 前言13-18
- 参考文献16-18
- 第一部分 大鼠 BMSCs 的体外培养、纯化与鉴定18-26
- 1 材料和方法18-22
- 2 结果22-24
- 3 讨论24-25
- 参考文献25-26
- 第二部分 aFGF 诱导大鼠 BMSCs 分化为 NSCs 并鉴定 NSCs26-40
- 1 材料和方法27-32
- 2 结果32-37
- 3 讨论37-38
- 参考文献38-40
- 全文总结40-41
- 文献综述41-50
- 参考文献46-50
- 致谢50-51
- 攻读硕士期间发表的论文51-52
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘永良;孙培;李泽福;隋德华;刘鹏飞;邵伟;;Wistar大鼠骨髓源性神经干细胞分离与培养及其鉴定[J];滨州医学院学报;2010年06期
2 鄢文海;许p芑
本文编号:522334
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